蛋白分析FAQ汇总

• • 在做SDS-PAGE时候怎么算蛋白上样量? 上样量多少合适啊?上样体积多少呀?

  解决SDS-PAGE实验中关于“上样量”和“上样体积”的问题，需要根据具体实验类型、实验目的和实验材料来进行分析。为了给出准确建议，需要结合您的样本浓度、凝胶孔尺寸、实验目的（如考察条带清晰度、后续转膜或质谱应用）等信息。  

• • WB蛋白裂解完直接放-80和蛋白变性之后放-80哪种更好？

  蛋白裂解后是直接放入-80℃保存还是经过变性（加SDS样本缓冲液并煮沸）后再保存，主要取决于实验目的和使用计划。若样品仅用于WB且短期内使用完毕，推荐变性后保存；若有多用途或重复使用需求，推荐裂解后立即-80保存，使用前再变性处理更稳妥。

• • 请问SDS-PAGE上样时可以上不同的吗，还是一个胶板都要一样的？

  SDS-PAGE 上样时每个泳道可加载不同样本，实验设计上无须整块胶板样本完全一致。但为确保条带可比性与数据可靠性，需严格控制蛋白量、样品处理条件与加载体积的一致性，同时设置适当对照和Marker以便结果判读。合理规划样品布局是获得清晰、可解释电泳结果的关键。

• • 请问蛋白提取出来先放-80，第二天测可以吗？

  蛋白裂解后-80°C冻存过夜，次日测定在操作规范的前提下是完全可行的。建议样品分装冻存，避免反复冻融，解冻后立即上样，确保数据质量。

• • 请问交联法蛋白相互作用分析的实验方法是怎样的？dss用的浓度是多少？

  交联法（cross-linking）用于蛋白质相互作用分析时，核心思想是利用可与氨基酸侧链反应的双功能交联剂将相互作用的蛋白质共价固定，从而增强弱相互作用的稳定性，便于后续富集和鉴定。

• • 请问来不及跑wb，蛋白是加裂解液冻-80比较稳定，还是直接细胞冻-80，还是加buffer煮了再冻-80？

  优选做法：细胞裂解后立即加抑制剂、加裂解液匀浆，煮沸后速冻 -80°C；必要时可分装避免反复冻融。如确实无法及时裂解，次选为细胞冻存，但需确保解冻迅速、补加新鲜抑制剂并尽快处理。

• • 请问蛋白不煮放-80能保存多久？

  蛋白未煮沸、裂解后含抑制剂 -80°C冻存：推荐1个月内使用为最佳，最长不超过3个月。

• • 请问可以通过质谱检测某种蛋白的糖链结构吗？

  是的，质谱不仅能识别某个蛋白是否有糖基化修饰，还能进一步解析糖基化位点和糖链结构，尤其在结合色谱分离和高级碎裂技术后，可以达到较高的结构分辨率。

• • WB蛋白没加loadingbuffer直接放进-80保存了，已经测过蛋白浓度，2周以内跑会有影响吗？

  2周以内在-80°C冻存、未加loading buffer的蛋白样本，一般来说影响较小，大多数蛋白可以正常跑 WB，但可能会有轻微降解或信号减弱的风险，特别是对不稳定蛋白（如磷酸化蛋白）影响稍大。如果蛋白稳定性较好且冻存期间未反复冻融，基本不影响使用。

• • WB蛋白不加Loading，也没有加蛋白酶抑制剂，直接放-80是不是就降解了呀？

  是的，这种情况下蛋白很可能已经部分降解了，具体分析如下：