完整糖基化分析

蛋白质糖基化是指糖基转移酶作用下，糖类化合物与蛋白质上的氨基酸残基形成糖苷键，将糖类化合物连接到蛋白质的过程。该过程从内质网开始，经过一系列修饰作用，最终在高尔基体完成。经过糖基化修饰的蛋白质被称为糖蛋白。

糖基化对生物制品的疗效、稳定性和免疫原性具有重要影响。寡糖谱和糖链结构是评估生物制品特性的重要指标。寡糖参与蛋白质折叠、信号传导等细胞过程，与蛋白质结合形成糖蛋白。糖蛋白常位于细胞表面，参与细菌、病毒的识别和凝集素等蛋白质的相互作用，对生物制品的正常功能至关重要。

寡糖的非模板合成和树状结构使得其结构解析变得困难。为解决这一问题，百泰派克生物科技BTP开发了一系列稳定且高效的液相色谱高分辨质谱（LC-MS/MS）表征方法。这些方法涵盖了从糖链分析到糖基化位点鉴定，再到糖肽解析的完整分析流程，能够准确分析寡糖的结构，为糖基化研究提供了强大的工具和技术支持。以下是基本流程图：

图1糖基化分析流程图

生物制品完整糖基化分析

糖基化肽段是指糖链连接在肽段上的形式，包含了肽段的氨基酸信息、完整的糖链信息以及糖链和肽段结合位点的信息。为了实现对特定糖蛋白完整意义上的糖基化分析，百泰派克生物科技BTP基于液质联用的高分辨质谱平台开发了相应的分析方法。通过这些方法，我们可以获取以下信息：

• 糖基化位点的定位，即蛋白质中哪些位点发生了糖基化修饰；

• 区分N糖基化位点和O糖基化位点，以确定糖链修饰的类型；

• 获取每个N糖基化位点对应的糖链组成、结构和相对含量信息；

• 获取每个O糖基化位点对应的糖链组成和相对含量信息；

• 对上述信息进行统计和总结，以便进一步分析和解释糖蛋白的糖基化特征。

这些分析结果将有助于我们深入了解糖蛋白的糖基化修饰情况，为研究糖蛋白的功能和生物学意义提供重要的信息。

实验仪器

• NanoLC: Vanquish NEO

• MS: Orbitrap Fusion Lumos With ETD

实验结果展示

1.糖基化修饰类别

表1 糖基化修饰类型统计

注：Type：糖基化修饰类型；Position：糖基化位点在蛋白中的位置；Glycans NHFAGNa：糖基化修饰的糖型；Modification Type(s)：糖型的分子量；Score：蛋白打分值；Intensity：蛋白的相对丰度；Percentage %：该种糖型在各自对应的位点的总糖型中所占的比例。

2.糖基化位点修饰效率

图2 糖基化效率统计图

注：糖基化效率（%）= * 100

3.每一个糖基化位点各种糖型比例

图3 糖型比例

注：图中为某一位点含有的N糖糖型和占比，横坐标为糖型，纵坐标为糖型的占比

4.蛋白糖基化修饰信息汇总图

图4 糖基化信息汇总

注：图中为每个位点上含量前三的糖

完整糖基化分析

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