蛋白分析FAQ汇总

• • 请问用液相测出浓度后，怎么计算样品纯度呢?

  一、常规HPLC法测定纯度（面积归一化法）适用条件：使用HPLC检测样品中各组分；检测器响应对不同组分近似一致（如使用UV检测器，且目标物与杂质具有相似吸收）；不涉及外标浓度定量，仅用于判断目标组分的纯度百分比。

• • 对待测样品进行干燥后，可以短期常温运输吗？

  是否可以短期常温运输干燥后的待测样品，需依据以下几个关键因素判断：一、样品类型 明确样品属于以下哪一类，不同样品在干燥状态下的稳定性差异显著：1、代谢组学样品（如血浆、尿液、组织等）2、蛋白组学样品（如蛋白提取物、酶解肽段）3、核酸类样品（RNA/DNA）4、微生物或细胞样品 5、化合物标准

• • WB蛋白加了loading70℃煮了七八分钟还能用吗？

  可以的。70 °C加上loading buffer煮7–8 分钟属于常见的预变性条件，对大多数WB靶标不会造成问题，完全可以上胶/转膜继续做。但可能存在变性不完全的风险。如目标蛋白结构复杂、分子量较大或对结果要求较高，建议重新取样进行变性处理以确保实验可靠性。还需留意以下几种情况：易聚集或高

• • 请问在高分辨质谱分子量鉴定中，去卷积需要用到什么软件?

  高分辨质谱（High-Resolution Mass Spectrometry, HRMS）数据中进行分子量鉴定时，去卷积（Deconvolution）是关键步骤，特别适用于多电荷离子谱（如蛋白、抗体、肽段等）的分析。常用去卷积软件根据平台和需求有所不同，分类如下：一、商业软件（配套硬件）二

• • 请问把取出的脑组织放在PBS中用干冰运输，会被冻住吗？

  是的，将脑组织放在 PBS 中并置于干冰（-78.5 °C）环境中运输，会导致组织连同 PBS 一起冻结。原因分析如下：1、PBS 溶液含水量高，冰点接近纯水（~0 °C），在干冰条件下必然结冰；2、脑组织含水量同样很高，在冷冻环境中也会被迅速冻住；3、干冰提供的是极低温度（-78.5 °C

• • 请问液氮冻了之后血清还能用来做Elisa吗？

  血清如果在未经控速降温保护的情况下直接冻存在液氮中，可能会出现反复冻融或过快降温导致的蛋白质变性、沉淀或活性丧失，从而影响 ELISA 结果。具体判断能否继续用于 ELISA 需结合以下几点：一、样本受损风险分析 1、是否反复冻融 ELISA 对目标蛋白结构和抗原性敏感，反复冻融会导致蛋白变

• • 如果血样不能立马离心，需要用冰块低温存储吗?

  是的，若血样采集后不能立即离心，应在冰块上或4°C条件下临时低温保存，以最大程度减缓细胞代谢和溶血，防止蛋白酶、核酸酶等活性破坏血浆或血清组分。分析如下：一、延迟离心的风险 全血样本若在室温下放置过久，会导致：1、红细胞溶血，释放细胞内蛋白、RNA、代谢物，影响分析准确性；2、白细胞持续代谢

• • 做了外泌体蛋白质谱，不确定下一步该如何分析？如何根据 Excel 结果解析质谱数据？

  如已完成上机，并手头有质谱结果 Excel 文件，以下是常规分析思路：一、基本数据整理（基于Excel表格）常见输出包含以下信息表格（文件名可能类似）：proteinGroups.txt / ProteinGroups.xlsx：蛋白定量表 peptides.txt：肽段信息 summary

• • 一批样品已加入Loading Buffer，但尚未进行煮沸变性，目前存放于-20℃。预计将在几周甚至一个月后使用，应该如何保存？

  对于已加入Loading Buffer但尚未煮沸变性的蛋白样品，长期保存需权衡蛋白稳定性与后续实验兼容性。具体建议如下：一、推荐保存条件 温度 建议改为-80°C保存，以最大限度减缓蛋白降解与蛋白酶活性。冻存形式：可直接原管冻存，无需分装，但若样品量较大，建议分装成一次用量，避免反复冻融。注

• • 蛋白复煮温度时间是多久呢？稀释之后还能煮吗？

  蛋白样品复煮（即加热变性）通常用于SDS-PAGE上样前破坏蛋白的高级结构，确保电泳迁移主要反映分子量。具体复煮温度与时间如下：一、常规复煮条件温度：95°C 或 100°C（沸水）时间：5 分钟 若样品粘稠或高浓度、含有膜蛋白等复杂组分，可适当延长至 10 分钟，但避免过度煮沸导致蛋白降解