蛋白分析FAQ汇总

• • 请问SDS-PAGE上样时可以上不同的吗，还是一个胶板都要一样的？

  SDS-PAGE 上样时每个泳道可加载不同样本，实验设计上无须整块胶板样本完全一致。但为确保条带可比性与数据可靠性，需严格控制蛋白量、样品处理条件与加载体积的一致性，同时设置适当对照和Marker以便结果判读。合理规划样品布局是获得清晰、可解释电泳结果的关键。

• • 请问蛋白提取出来先放-80，第二天测可以吗？

  蛋白裂解后-80°C冻存过夜，次日测定在操作规范的前提下是完全可行的。建议样品分装冻存，避免反复冻融，解冻后立即上样，确保数据质量。

• • 请问交联法蛋白相互作用分析的实验方法是怎样的？dss用的浓度是多少？

  交联法（cross-linking）用于蛋白质相互作用分析时，核心思想是利用可与氨基酸侧链反应的双功能交联剂将相互作用的蛋白质共价固定，从而增强弱相互作用的稳定性，便于后续富集和鉴定。

• • 请问来不及跑wb，蛋白是加裂解液冻-80比较稳定，还是直接细胞冻-80，还是加buffer煮了再冻-80？

  优选做法：细胞裂解后立即加抑制剂、加裂解液匀浆，煮沸后速冻 -80°C；必要时可分装避免反复冻融。如确实无法及时裂解，次选为细胞冻存，但需确保解冻迅速、补加新鲜抑制剂并尽快处理。

• • 请问蛋白不煮放-80能保存多久？

  蛋白未煮沸、裂解后含抑制剂 -80°C冻存：推荐1个月内使用为最佳，最长不超过3个月。

• • 请问可以通过质谱检测某种蛋白的糖链结构吗？

  是的，质谱不仅能识别某个蛋白是否有糖基化修饰，还能进一步解析糖基化位点和糖链结构，尤其在结合色谱分离和高级碎裂技术后，可以达到较高的结构分辨率。

• • WB蛋白没加loadingbuffer直接放进-80保存了，已经测过蛋白浓度，2周以内跑会有影响吗？

  2周以内在-80°C冻存、未加loading buffer的蛋白样本，一般来说影响较小，大多数蛋白可以正常跑 WB，但可能会有轻微降解或信号减弱的风险，特别是对不稳定蛋白（如磷酸化蛋白）影响稍大。如果蛋白稳定性较好且冻存期间未反复冻融，基本不影响使用。

• • WB蛋白不加Loading，也没有加蛋白酶抑制剂，直接放-80是不是就降解了呀？

  是的，这种情况下蛋白很可能已经部分降解了，具体分析如下：

• • WB蛋白没煮沸、没加Loading直接放-80能保存多久呢？

  如果你没有加 loading buffer、也没有煮沸变性处理，就直接把蛋白样品放进-80°C冷冻，一般来说只能保存很短时间，即使是在超低温环境下，蛋白也还是会降解或者发生不可逆的聚集变性。

• • 多肽从头测序数据太多了，请问我该怎么处理呢？

  多肽从头测序（de novo sequencing）常常面临数据量庞大的问题，尤其是采用质谱（如LC-MS/MS）分析时，往往会产生大量候选序列及其对应的打分信息，数据中还可能存在显著的冗余，给后续筛选和分析带来挑战。为高效处理这些数据，建议你按照以下步骤进行整理和筛选：