蛋白分析FAQ汇总

• • 一批样品已加入Loading Buffer，但尚未进行煮沸变性，目前存放于-20℃。预计将在几周甚至一个月后使用，应该如何保存？

  对于已加入Loading Buffer但尚未煮沸变性的蛋白样品，长期保存需权衡蛋白稳定性与后续实验兼容性。具体建议如下：一、推荐保存条件 温度 建议改为-80°C保存，以最大限度减缓蛋白降解与蛋白酶活性。冻存形式：可直接原管冻存，无需分装，但若样品量较大，建议分装成一次用量，避免反复冻融。注

• • 蛋白复煮温度时间是多久呢？稀释之后还能煮吗？

  蛋白样品复煮（即加热变性）通常用于SDS-PAGE上样前破坏蛋白的高级结构，确保电泳迁移主要反映分子量。具体复煮温度与时间如下：一、常规复煮条件温度：95°C 或 100°C（沸水）时间：5 分钟 若样品粘稠或高浓度、含有膜蛋白等复杂组分，可适当延长至 10 分钟，但避免过度煮沸导致蛋白降解

• • SUMO相关实验通常如何设计？若采用Western Blot，应选择哪类抗体？实验体系可以自行构建吗？

  针对SUMO（Small Ubiquitin-like Modifier）修饰的研究，实验设计需根据具体研究目的（如：是否关注全局SUMO化、特定位点修饰、或特定底物蛋白）做精确区分。以下分层说明：一、常见SUMO相关实验设计策略 1、总SUMO化水平检测 目的：观察细胞/组织中SUMO化动

• • 请问完成质谱肽段序列鉴定后，拿到结果接下来要怎么分析呢？

  质谱获得肽段序列鉴定结果后，下一步分析需根据研究目标（定性、定量、功能研究）分步骤进行。一般流程如下：一、结果质量控制与过滤 检查数据库搜索结果的打分指标（如Peptide/Protein FDR、Score、Unique peptide数）。剔除低置信度蛋白或仅1条肽段支持的结果，确保数据

• • 请问没有变性的蛋白会更容易降解吗？提取的蛋白放-80°C能保存多久呀？

  需要区分两方面：蛋白质自身结构状态与保存条件对稳定性的影响。一、未变性蛋白的降解风险 天然构象的蛋白保留了完整的空间结构，通常也保持活性。如果溶液中存在残留蛋白酶或微量金属离子，这类蛋白因易被识别、切割而降解速度较快。变性处理（如加 SDS、尿素、加热）会失去结构和活性，多数蛋白酶难以切割，

• • 请问液相色谱用面积和时间怎么看不同干预下相对的浓度高低呢？

  在液相色谱（LC）分析中，样品中目标物的相对浓度通常通过峰面积（peak area）评估，而时间（保留时间，Retention Time, RT）主要用于判定组分身份，而非直接表示浓度。要比较不同干预条件下目标物浓度高低，应按以下步骤判断：一、锁定对应化合物的保留时间 不同条件下，保留时间可

• • 请问采集泪液的毛细管是不是一次性微量采血吸管？

  通常情况下，用于采集泪液的毛细管并非普通的一次性微量采血吸管，而是专门的无添加、无涂层的玻璃或塑料毛细管，常见规格为内径0.5–1.0 mm、长度约5–10 cm，容量多为1–10 µL。主要区别 1、无抗凝剂或其他添加物：采血用毛细管通常内壁涂有肝素或其他抗凝剂，可能干扰后续蛋白组学或代谢

• • 怎么鉴定加药与不加药情况下二聚体的含量呢？

  要准确比较加药与不加药条件下二聚体含量，需明确：蛋白性质（是否可溶、是否易聚集）、检测环境（体外纯化蛋白还是细胞/组织裂解液）、目标是否为定性或定量分析。通常可考虑以下策略：一、凝胶电泳结合定量 1、原理：二聚体相对单体在非还原、低变性条件下可保持构象差异。2、方法：使用非还原 SDS-PA

• • IP样品于室温放置近一天（已煮沸），但忘记未取出且夜间仪器已关闭，还能继续使用吗？

  需重点考虑以下几点：一、蛋白完整性 1、已经煮沸（通常含 SDS、还原剂），样品中大部分天然构象和酶活性已被破坏，理论上不会再发生显著降解。2、但长时间室温暴露可能导致部分易沉淀或不溶的组分聚集，尤其含高浓度 SDS 或尿素时，温度下降后易析出。二、微生物污染与缓冲体系 1、若缓冲液中无抑菌

• • 用docking软件，预测完多肽之后要用什么去验证结合呢？

  通常在分子对接（docking）预测出多肽与靶标蛋白的结合模式后，需要通过实验手段验证其结合亲和力与特异性。常用方法可分为两类：一、生化或生物物理方法（直接测定结合）1、表面等离子共振（SPR）可获得实时结合动力学参数（ka、kd）及平衡解离常数（KD），适合验证亲和力及动力学特征。2、等温