蛋白真空离心浓缩后用0.1%甲酸水溶液复溶但仍浑浊，这样还能进质谱吗？上常规源质谱的蛋白质浓度要求多少？最多能上样多少蛋白？

在处理蛋白质样品用于质谱分析时，出现样品浑浊的问题可能会影响最终的分析结果。以下是针对你的问题的一些解决方案和建议：

 

一、蛋白质真空离心浓缩后复溶浑浊的解决方案

1、浑浊原因分析

（1）蛋白质可能聚集或部分变性，导致溶解性下降。

（2）0.1%甲酸可能不足以完全溶解某些蛋白质，尤其是疏水性或变性蛋白。

（3）溶液中可能含有不溶性杂质。

 

2、解决方案

（1）提高甲酸浓度：尝试用1%甲酸进行复溶。

（2）超声处理：短时间低功率超声，帮助蛋白质分散。

（3）加少量有机溶剂：如50%乙腈/水+0.1%甲酸，有助于改善蛋白溶解性。

（4）增加温度：在37°C温浴中温和孵育15–30分钟。

（5）离心除杂：12000 g离心10分钟，取上清进行质谱分析。

（6）酶解后进质谱：如果蛋白无法直接溶解，可进行胰蛋白酶消化后再进行质谱分析。

 

二、是否还能进质谱？

1、如果通过上述处理后溶液仍然浑浊，但上清中有蛋白质，仍可进行质谱分析。

2、质谱对样品的澄清度要求不高，但杂质过多可能影响离子化效率。

3、如果浑浊无法消除，建议取澄清上清进行分析。

 

三、常规质谱对蛋白质浓度的要求

1、浓度要求

（1）常规源质谱（如LC-MS/MS）：蛋白质浓度建议在0.5–1 μg/μL。

（2）最低浓度要求：至少达到0.1 μg/μL，低于此浓度可能无法检测到有效信号。

 

2、最多上样量

（1）单次上样通常不超过10 μg，过量上样可能导致离子抑制效应，影响定量准确性。

（2）推荐1–5 μg的上样量，具体取决于仪器灵敏度和样品复杂度。

 

四、建议步骤

1、调整复溶条件（增加甲酸浓度或有机溶剂）。

2、超声或加热辅助溶解。

3、离心去除不溶物，取上清。

4、控制蛋白浓度在0.5–1 μg/μL。

5、单次上样量控制在1–5 μg范围内。

 

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