蛋白裂解后未测浓度直接冻存，分装会降解吗？

一、问题核心分析

1、裂解后未测浓度、未分装直接冻存

此时蛋白浓度未知也未进行等量分装，意味着后续使用时需反复开冻、混匀、再分装，存在冻融循环风险。

 

2、冻存后再解冻进行浓度测定和分装

解冻过程中，特别是加热（如煮样测浓度）会进一步促进蛋白变性、酶活丧失或结构破坏。

 

3、再次分装后的“继续-80”保存

解冻→分装→再次冻存，即使短时间处理也构成一次完整冻融循环，对于敏感蛋白（特别是酶类、信号通路蛋白、磷酸化蛋白等）可能会造成不可逆损伤。

 

二、建议操作流程

当前补救建议：

若冻存时间不长（<1周），可按以下方式操作以尽量减少损失：

1、一次性缓慢解冻（4℃冰浴），避免热激

保持裂解液处于低温状态，防止蛋白快速变性。

 

2、立即分装为小体积

根据后续用途分装冻存，每管一次性使用完毕，避免再次冻融。

• 若用于WB、SDS-PAGE，可考虑煮后分装冻存。
• 若用于Co-IP、酶活检测、pull-down等功能实验，不建议煮样，应维持原态、低温保存（-80°C）并避免冻融。
• 若不确定用途或需多用途，建议分装两类样本：一部分煮样用于定量或WB，一部分保持原态用于后续需求

 

3、加蛋白酶抑制剂（如未加）

如最初裂解液未含蛋白酶抑制剂，解冻后应立即补加，尽量控制蛋白水解风险。

 

三、后续优化建议（用于未来实验）

1、裂解当日测浓度、分装后再冻存，确保一次冻融；

2、使用含蛋白酶/磷酸酶抑制剂的裂解液，提升蛋白稳定性；

3、优先冻存在低吸附管中，减轻吸附损失。

 

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