蛋白分析FAQ汇总

• • fret怎么做？有什么方法检测构象改变呢？

  关于FRET（Fluorescence Resonance Energy Transfer，荧光共振能量转移）实验设计与其用于构象变化检测的应用，回答如下：   一、FRET原理简述 FRET是一种基于两个荧光分子之间能量转移的技术，当供体（donor）荧光分子被激发后，若其与受体（acce

• • 想让一个蛋白形成二聚,可以采用交联剂把蛋白形成二聚嘛?

  可以，使用化学交联剂是一种常见策略来促进蛋白形成二聚体（或更高聚体），尤其在原位二聚能力较弱或需验证蛋白相互作用的情况下。不过需注意以下几个关键点：   一、是否适合用交联剂形成二聚体？ 交联剂适用于以下情况： 天然二聚较弱/可逆，需稳定二聚体结构； 验证蛋白-蛋白相互作用（PPI）

• • 蛋白胶点、胶条、IP样品蛋白质鉴定：送样前怎么保存啊

  蛋白胶点和胶条应在脱色和脱水处理后风干，干燥状态下于–20°C或–80°C保存，避免潮湿和冻融；IP样品则应加入蛋白酶抑制剂并分装冷冻，若蛋白量少建议先TCA沉淀浓缩后再保存。所有样品在送质谱前都应使用无酶耗材处理，并保持低温冷链运输以最大程度保护蛋白的稳定性和鉴定质量。   一、蛋白胶点/

• • 请问纯化后蛋白浓度很高怎么稀释呢？用裂解液还是用纯化的elution buffer呢？

  稀释纯化后高浓度蛋白时，选择合适的稀释液非常重要，优先使用洗脱缓冲液，同时要缓慢稀释并注意避免蛋白失活。   一、稀释液的选择 通常建议使用与蛋白纯化过程中最后一步一致的缓冲液也就是纯化的 elution buffer（洗脱缓冲液），原因如下： 1、保持蛋白的稳定性：洗脱缓冲液的成分（如盐浓

• • 请问WB跑出来为什么都是一些空白的框，周围背景是黑色的？

  出现这种问题通常意味着在实验中出现了一些技术上的问题，导致膜上显示的信号不符合预期。以下是一些可能的原因以及解决方案：   一、抗体相关问题 1、可能原因 一抗浓度太低，未能特异性结合靶蛋白。 二抗浓度不足或已经失效。 抗体质量不佳，对目标蛋白特异性差。 2、解决方案

• • 请问sds 蛋白胶的制作方法是什么？

  下面是制作SDS-PAGE的蛋白胶的详细步骤可供参考：   一、材料与试剂 1、主要试剂 （1）丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺溶液 (通常30%浓度，29:1比例) （2）Tris-HCl缓冲液（pH值分别为6.8和8.8） （3）SDS溶液（10%） （4）TEMED（二甲基乙二胺，促进聚合）

• • WB蛋白没加loading 放进-80了，可以保存多久？后续解冻跑BCA会有影响吗？

  未加 loading buffer 的蛋白样本在 –80°C 条件下可稳定保存约 1 个月，若未加蛋白酶抑制剂则应尽快使用。解冻后进行 BCA 蛋白定量一般不会有太大问题，只要避免反复冻融并尽快操作；但需注意冻融可能会导致部分蛋白降解或聚集，从而轻微影响定量结果。   一、保存多久没问题？

• • 请问怎么查目标抗体的WB蛋白质印迹的转膜时间和分子量？

  要查找目标蛋白在WB中的分子量以及确定转膜时间，可以按照以下步骤进行：   一、确认目标蛋白的分子量 1、查找数据库：常用数据库如UniProt（https://www.uniprot.org/）和NCBI（https://www.ncbi.nlm.nih.gov/protein/）可以提供

• • 请问蛋白质二硫键怎么交联上呢？

  二硫键（Disulfide Bond, S-S）是一种共价键，形成于两个半胱氨酸残基之间的巯基（-SH）氧化反应，连接成二硫键（-S-S-）。二硫键在蛋白质的结构稳定性、折叠和功能中起着重要作用。   一、二硫键交联的形成过程 1、前提条件 （1）蛋白质中必须含有半胱氨酸（Cysteine,

• • 请问怎样从壳聚糖-蛋白质复合物中提取出蛋白质，或者从其中完全除去壳聚糖?

  壳聚糖与蛋白质之间可能通过静电、氢键或疏水相互作用形成复合物，因此分离的关键是要破坏或干扰这些相互作用。   一、解离壳聚糖-蛋白质复合物的方法 为了从复合物中提取蛋白质或去除壳聚糖，可以采用以下方法： 1、改变pH值 壳聚糖在酸性条件下溶解较好，而在碱性条件下形成沉淀，调整pH是破坏壳聚糖