蛋白分析FAQ汇总

• • WB蛋白没煮沸、没加Loading直接放-80能保存多久呢？

  如果你没有加 loading buffer、也没有煮沸变性处理，就直接把蛋白样品放进-80°C冷冻，一般来说只能保存很短时间，即使是在超低温环境下，蛋白也还是会降解或者发生不可逆的聚集变性。

• • 多肽从头测序数据太多了，请问我该怎么处理呢？

  多肽从头测序（de novo sequencing）常常面临数据量庞大的问题，尤其是采用质谱（如LC-MS/MS）分析时，往往会产生大量候选序列及其对应的打分信息，数据中还可能存在显著的冗余，给后续筛选和分析带来挑战。为高效处理这些数据，建议你按照以下步骤进行整理和筛选：

• • 请问loading buffer5怎么稀释成1？

  在生物实验中，Loading Buffer 5×（5倍浓缩的上样缓冲液）通常用于凝胶电泳上样前的样品处理。要将5× Loading Buffer 稀释为1×工作浓度，可以按照以下方法进行操作：

• • WB蛋白裂解超声完不加buffer和不煮沸直接放-80两三天可以吗？

  不推荐。如果不加缓冲液、不煮沸，直接-80°C冷冻2-3天，可能会导致蛋白降解或沉淀，影响WB结果；建议加缓冲液+蛋白酶抑制剂后再冷冻以确保蛋白稳定性。

• • 请问同时在一块胶上跑还原SDS-PAGE和非还原SDS-PAGE有影响吗?

  不推荐同时在同一块胶上跑还原（reducing）SDS-PAGE和非还原（non-reducing）SDS-PAGE，主要原因如下：

• • 请问WB没加loading放进-80可以保存多久？膜蛋白是不是不能煮样,难道每一次都要bca吗？

  WB样品未加loading buffer放-80°C，短期（1-2周）可行，长期不推荐。膜蛋白一般不建议煮沸，可用低温孵育或温和裂解法。BCA蛋白定量建议每次都做，除非实验条件极其稳定。以下为详细解释：

• • 我现在需要检测8种多肽，每条多肽氨基酸数量在16-38，暂时没有发现有人测过，请问有什么合适的方法吗？

  检测8种多肽（氨基酸长度16-38），如果没有文献先例，可根据你的实验需求（定性 or 定量、灵敏度、通量等）选择合适的方法。以下是推荐的几种主要检测方法：

• • 做质谱要怎么跑胶呢？

  在进行质谱分析之前，样品通常需要经过凝胶电泳（跑胶）分离以去除杂质和富集目标蛋白。下面是一个关于如何跑胶以进行质谱分析的详细步骤指导。

• • 做质谱跑胶怎么知道是否跑到分离胶呢？

  在质谱跑胶（SDS-PAGE）实验中，为了确认蛋白是否跑到分离胶，可以采取以下方法：

• • 做wb实验蛋白提取了没有离心怎样保存啊？

  在 Western Blot (WB) 实验中，如果蛋白提取后未进行离心，但需要暂时保存，建议按照以下方式操作：