蛋白分析FAQ汇总

• • 蛋白质磷酸化在信号传递中的作用是什么?

  蛋白质磷酸化在信号传递中的具体作用有： 1、调节蛋白质活性：磷酸化可以激活或抑制酶的活性。例如，许多蛋白激酶通过自身或下游靶蛋白的磷酸化来调节其功能，这在信号传导途径中起到了“开关”作用。 2、调控蛋白质相互作用：磷酸化改变蛋白质的结构，使其与其他蛋白质、DNA或膜的结合能力发生变化。这种变

• • 蛋白质圆二色谱分析对蛋白质纯度有要求吗？

  蛋白质圆二色谱（CD）分析对蛋白质的纯度和浓度都有一定要求：   1、纯度要求 为了避免杂质对二级结构信号的干扰，样品应尽可能纯净；杂质如多肽、其他蛋白质或核酸可能会吸收或散射光，导致测量结果偏差；通常蛋白质的纯度应在90%以上，理想情况下甚至接近95%-99%。   2、浓度要求 样品浓度

• • Western blot实验内参蛋白跑出来了，目的蛋白没有条带是怎么回事？

  Western blot实验中内参蛋白有条带，但目的蛋白没有条带可能是由于以下几种原因造成的：   一、抗体问题 1、抗体特异性不强或失效：目的蛋白的抗体可能失效或不具备足够的特异性。建议检查抗体的存储条件、使用时长，或者更换一个新的抗体。 2、抗体浓度不合适：抗体的工作浓度可能过低或过高。

• • 请问2万Da分子大小的肽做液相用什么柱子？

  对于分子量接近2万Da的肽进行液相色谱分离时，通常使用较大孔径的反相高效液相色谱（RP-HPLC）柱，特别是C18柱。   一、C18反相柱 C18柱是最常用的柱子，适合用于肽和蛋白质的分离。对于分子量较大的肽，孔径的选择尤为重要。通常对于2万Da左右的肽，建议使用孔径为300Å（或更大）的

• • 非变性蛋白，未煮，未变性，加loading后可以直接冻存吗？可以加一点ME吗？

  是的，未变性蛋白样品在加loading buffer（上样缓冲液）后是可以直接冻存的，但需要注意以下几点： 可以直接冻存的条件： （1）上样缓冲液（Loading Buffer）不含SDS或变性剂 如果你使用的是非还原性、非变性条件的上样缓冲液（如没有SDS、没有DTT/β-ME、没有加热

• • 请问如何确定蛋白质的分子量，因为预测二级结构好像有这些数据？

  您提到“预测二级结构可能使用蛋白质的分子量信息“，这种说法可能存在误解。蛋白质分子量主要用于分离与鉴定，与二级结构预测并无直接依赖关系。

• • 请问肠组织不加loading buffer直接放-80可以保存多久?

  未经处理的肠组织置于-80℃冷冻保存建议时间不超过1个月，且不适用于高质量蛋白或RNA分析。 若对后续数据质量有要求，建议尽快按实验方向分组处理或加保护剂冷冻。

• • 请问wb提取后的蛋白放在负八十后，重新加loading的话还需要再次测量蛋白浓度吗？

  若蛋白冻存前未加上样缓冲液并未变性处理，则重新加loading前应重新测定蛋白浓度以确保上样准确性和重复性；若已加缓冲液并变性，可直接使用，但仍需控制冻融次数，防止蛋白降解。

• • 如果想测定蛋白NC端，样品的条件是怎样的？

  蛋白N端测定的样品准备对实验结果至关重要，具体条件需根据所采用的方法（如Edman降解、质谱法）略作调整。蛋白C端测定的实验挑战性相对更高，因其缺乏类似Edman降解的经典方法，主要依赖质谱法结合特异性策略实现。

• • 蛋白裂解后未测浓度直接冻存，分装会降解吗？

  为避免蛋白因冻融循环造成的降解风险，建议将当前样品在低温下一次性解冻后立即分装，测浓度和后续使用的部分应分别处理，避免回冻。同时，应尽可能补加蛋白酶抑制剂以减缓降解。未来实验中应在裂解后当日完成蛋白定量与分装，确保冻存样品仅经历一次冻融过程，从源头保障蛋白样本的稳定性与实验结果的可靠性。