蛋白胶点、胶条、IP样品蛋白质鉴定：送样前怎么保存啊

蛋白胶点和胶条应在脱色和脱水处理后风干，干燥状态下于–20°C或–80°C保存，避免潮湿和冻融；IP样品则应加入蛋白酶抑制剂并分装冷冻，若蛋白量少建议先TCA沉淀浓缩后再保存。所有样品在送质谱前都应使用无酶耗材处理，并保持低温冷链运输以最大程度保护蛋白的稳定性和鉴定质量。

 

一、蛋白胶点/胶条（凝胶中切下的条/点）

保存方式：

1、用无水乙腈（ACN）+ 25 mM NH₄HCO₃清洗后脱色干净。

2、脱水（ACN）处理后风干或SpeedVac干燥。

3、保存于1.5 mL无酶EP管中，-20°C或-80°C保存，避免潮湿和反复冻融。

建议：送样前可短期（1周内）-20°C保存，长期建议 -80°C 干燥状态。

 

二、IP（免疫共沉淀）样品

保存方式：

1、如果是裂解液中富集的蛋白（未加loading buffer）

（1）加入蛋白酶抑制剂后，分装并存于 -80°C；

（2）避免反复冻融。

 

2、如果是洗脱态蛋白样本（已纯化）

（1）推荐使用HPH EB (0.5 M NH₄OH, 0.5 mM EDTA) 缓冲体系进行蛋白洗脱，保证洗脱缓冲体系与后续的质谱实验兼容；

（2）洗脱后可直接加三氯乙酸（TCA）沉淀，收集蛋白沉淀；

（3）用冷乙醇或丙酮洗涤干净后，风干或SpeedVac，-80°C保存。

 

3、若IP蛋白较少或浓度低，建议TCA沉淀处理后再送样，利于富集和保存。

 

三、通用建议

1、使用无酶耗材（如无DNA酶、RNA酶、蛋白酶污染的EP管、枪头）；

2、贴标签注明样本信息（实验组、样本编号、时间等）；

3、避免反复冻融，必要时分装；

4、运输时使用干冰，全程低温冷链。

 

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