WB蛋白没加loading 放进-80了，可以保存多久？后续解冻跑BCA会有影响吗？
未加 loading buffer 的蛋白样本在 –80°C 条件下可稳定保存约 1 个月，若未加蛋白酶抑制剂则应尽快使用。解冻后进行 BCA 蛋白定量一般不会有太大问题，只要避免反复冻融并尽快操作；但需注意冻融可能会导致部分蛋白降解或聚集，从而轻微影响定量结果。
一、保存多久没问题？
1、在 –80°C 冷冻保存未加 loading buffer 的蛋白样本，如果是细胞裂解液或组织匀浆液（比如 RIPA 裂解），通常能稳定保存 1～3 个月。
2、但时间越短越好，建议在 1个月内使用，因为蛋白可能逐渐降解或变性，尤其是蛋白酶抑制剂失活后。
3、若保存前没有加蛋白酶抑制剂（如PMSF、cocktail等），则建议尽快使用，最好不要超过1–2周。
二、后续解冻再做BCA蛋白定量，会有影响吗？
有一定影响，但通常问题不大，前提是：
1、样本保持冷冻状态，只冻融一次；
2、裂解液中含有适量的蛋白酶抑制剂；
3、解冻后立即进行BCA定量，避免长时间放置在室温或4°C。
注意：
1、冻融过程可能导致部分蛋白变性、聚集，可能会略微影响BCA结果（有时会低估浓度）；
2、BCA对还原剂、去垢剂等敏感，解冻后做 BCA 前，确认裂解液中缓冲体系对 BCA 兼容性没问题。
三、建议操作
1、解冻样本后立刻分装并加 loading buffer，加热变性后做 WB；
2、若需做 BCA，尽快操作避免反复冻融；
3、若蛋白浓度对实验很关键可考虑平行做几个样本的定量对照下判断。
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