请问纯化后蛋白浓度很高怎么稀释呢？用裂解液还是用纯化的elution buffer呢？

稀释纯化后高浓度蛋白时，选择合适的稀释液非常重要，优先使用洗脱缓冲液，同时要缓慢稀释并注意避免蛋白失活。

 

一、稀释液的选择

通常建议使用与蛋白纯化过程中最后一步一致的缓冲液也就是纯化的 elution buffer（洗脱缓冲液），原因如下：

1、保持蛋白的稳定性：洗脱缓冲液的成分（如盐浓度、pH值、离子强度、添加剂等）已经被优化以确保蛋白的溶解性和活性，能更好地维持蛋白的原始状态。

2、避免蛋白沉淀或失活：使用裂解液可能会引入与当前蛋白环境不匹配的成分，导致蛋白沉淀或失活。

如果您需要稀释蛋白进行后续实验（如活性测试、晶体学或功能性实验），而洗脱缓冲液的成分对后续步骤不合适，可以在稀释后进行缓冲液置换（例如通过透析或超滤浓缩结合缓冲液交换）。

 

二、稀释方法

1、逐步稀释法

（1）准备与洗脱缓冲液一致的稀释液。

（2）逐步加入稀释液并轻轻混匀，避免因稀释速度过快造成局部高浓度变化引起蛋白沉淀或失活。

（3）最后调整到目标浓度。

 

2、混合注意事项

（1）不要剧烈搅拌以免引起蛋白变性或剪切。

（2）如果稀释后蛋白浓度仍较高，可以在低温条件下存放以减少聚集风险。

 

三、其他建议

1、如果蛋白需要长时间储存，建议加入稳定剂，如 甘油（5%-20%） 或 适量盐（例如NaCl）。

2、如果洗脱缓冲液中含有潜在对后续实验有干扰的组分（如高浓度咪唑），则可以在稀释后尽快置换缓冲液。

 

四、裂解液的使用

通常情况下，裂解液的成分与洗脱缓冲液不同（如含有裂解助剂、去污剂或其他蛋白保护剂），使用裂解液稀释可能会引起蛋白的沉淀或干扰后续实验，因此不推荐直接使用裂解液。

 

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