请问sds 蛋白胶的制作方法是什么？

下面是制作SDS-PAGE的蛋白胶的详细步骤可供参考：

 

一、材料与试剂

1、主要试剂

（1）丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺溶液 (通常30%浓度，29:1比例)

（2）Tris-HCl缓冲液（pH值分别为6.8和8.8）

（3）SDS溶液（10%）

（4）TEMED（二甲基乙二胺，促进聚合）

（5）过硫酸铵 (APS，10%新鲜配制，用作自由基引发剂)

（6）去离子水

 

2、其他材料

（1）电泳玻璃板、胶盒

（2）梯度胶装置（如果使用梯度胶）

（3）样品上样梳

 

3、实验设备

（1）电泳槽

（2）微量移液器

 

二、实验步骤

1、准备工作

（1）清洗电泳玻璃板，确保无灰尘和油脂。

（2）将玻璃板安装在电泳胶盒中，确保密封无漏液。

 

2、配制分离胶（下层胶）

分离胶浓度根据蛋白分子量的大小决定（常见为10-12%）。

（1）配方举例（10%分离胶，10 mL总量）

• 丙烯酰胺/甲叉双丙烯酰胺溶液：3.3 mL

• Tris-HCl缓冲液 (1.5 M, pH 8.8)：2.5 mL

• SDS (10%)：0.1 mL

• 去离子水：4.0 mL

• APS (10%)：50 µL

• TEMED：5 µL

 

（2）操作

• 混合上述试剂，最后加入APS和TEMED（加入后要迅速操作，避免凝胶过早聚合）。

• 将分离胶倒入胶盒，液面离顶部约1-2 cm。

• 用去离子水或异丙醇覆盖表面，防止与空气接触形成气泡。

• 等待10-20分钟，观察分离胶完全聚合。

 

3、配制浓缩胶（上层胶）

浓缩胶用于聚集样品，通常固定为4%。

（1）配方举例（4%浓缩胶，5 mL总量）

• 丙烯酰胺/甲叉双丙烯酰胺溶液：0.67 mL

• Tris-HCl缓冲液 (0.5 M, pH 6.8)：1.25 mL

• SDS (10%)：0.05 mL

• 去离子水：3.0 mL

• APS (10%)：25 µL

• TEMED：5 µL

 

（2）操作

• 倒掉分离胶表面的水或异丙醇，用滤纸擦干。

• 混合浓缩胶试剂，最后加入APS和TEMED。

• 倒入浓缩胶，并迅速插入上样梳。

• 等待10-15分钟，确保凝胶完全聚合。

 

4、拆除上样梳

小心拆除梳子，清洗上样孔，确保无未聚合的凝胶残留。

 

5、使用前准备

（1）将凝胶安装在电泳槽中，加入电泳缓冲液（如1X SDS-PAGE运行缓冲液）。

（2）上样前检查电泳系统是否漏液，确保电泳系统正常。

 

三、注意事项

1、比例调整

分离胶浓度选择：

（1）6-8%：分离大分子蛋白（>100 kDa）

（2）10-12%：分离中分子蛋白（20-100 kDa）

（3）15%：分离小分子蛋白（<20 kDa）

 

2、TEMED和APS最后加入

APS和TEMED加入后会迅速引发聚合反应，应快速操作。

 

3、空气隔离

分离胶灌注后用水或异丙醇覆盖，可防止氧气干扰聚合。

 

4、试剂新鲜

APS需现用现配，TEMED避免过量使用，否则会导致聚合过快或失败。

 

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