没有液氮心脏组织,离体后2分钟内就立马放入-80℃,还能做IncRNA测序吗?
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RIN值(RNA Integrity Number)≥7 是测序的基本要求;
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建议同时查看28S/18S比值和FastQC/Fragment Analyzer图谱;
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低表达lncRNA的丢失可能导致测序数据偏差。
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理想状态应立即液氮速冻或RNA稳定剂(如RNAlater)预处理;
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继续提取RNA并评估质量;
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若质量达标,可进入建库;
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后期分析时务必考虑样本处理方式作为潜在变量纳入分析模型。
若心脏组织离体后2分钟内迅速冷冻于–80℃,在没有液氮速冻的情况下仍有可能进行lncRNA测序,但需注意以下几点:
一、RNA降解风险分析
1、组织活性高:心脏组织富含核酸酶,代谢活跃,RNA尤其是长链非编码RNA(lncRNA)在离体后极易降解。
2、2分钟延迟:虽然时间较短,但在室温暴露期间可能已启动部分RNA降解,尤其对表达量低的lncRNA有较大影响。
二、影响评估与建议
1、RNA质量检测必做
2、组织处理标准建议
三、后续建议
若样本总数较多且该组织为唯一来源,建议:
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