蛋白分析FAQ汇总

• • 如何避免“斑块状”、不均匀的斑点出现在印迹上？

  为避免“斑块状”或印迹中出现不均匀的斑点，请尝试： • 检查用于细菌污染的所有缓冲液。 • 确保在抗体和洗涤孵育期间膜完全浸没。 • 在进行转印之前，梳理掉膜和凝胶之间的所有气泡。 • 通过将膜放在摇臂/摇床上，确保均匀接近整个印迹。 • 确保所有蛋白质印迹设备均已正确清洗。 • 过滤HRP

• • 蛋白印迹每泳道可以分析多少蛋白质？

  全细胞裂解物建议50ug，核酸提取物建议25ug。相关服务:蛋白质免疫印迹和电转移服务

• • 不同浓度的SDS-PAGE凝胶适合分离的多少分子量的蛋白样品？

  凝胶的浓度与其适合分离的蛋白分子量成反比，浓度越小的胶越适合分离大分子量的蛋白质样品。通常8%胶适合分离100kDa以上的蛋白；10%适合分离50-100kDa左右的蛋白；12%的凝胶适合分离14-15kDa左右的蛋白；50%的凝胶适合分离13kDa以下的蛋白样品。相关服务:基于SDS-PA

• • 在蛋白质印迹中应该使用哪种膜？

  建议使用硝化纤维素膜。虽然可以使用PVDF和其他类似的膜，但它们有时会导致背景增加。相关服务:蛋白质免疫印迹和电转移服务

• • WB应选择哪种封闭缓冲液？

  建议使用1X TBS、5%牛奶或0.05%吐温-20。封闭反应在室温下进行30-60min或在4℃下过夜。相关服务:蛋白质免疫印迹和电转移服务

• • WB实验中如何稀释一抗？

  可以根据一抗的说明书进行稀释，如果没有相关信息，可以对相关的阳性和阴性对照进行连续滴定。相关服务:蛋白质免疫印迹和电转移服务

• • 为什么实际的蛋白质印迹带大小与预测的不同？

  蛋白质印迹是一种按大小分离蛋白质的技术。一般来说，蛋白质越小，它通过SDS凝胶迁移的速度就越快。但是，迁移速度也受其他因素的影响，因此观察到的实际波段大小可能与预测的大小不同。比如：1、翻译后修饰-磷酸化和糖基化等，这就增加了蛋白质的大小；2、翻译-大多数蛋白质被合成为促蛋白，然后切割以产生

• • 为什么蛋白质印迹的信号微弱或根本没有信号？

  可能的原因有抗体浓度不够、抗体失效、冻干抗体溶解度不够或者被检测的组织/细胞没有不含有目标蛋白等。相关服务:蛋白质免疫印迹和电转移服务

• • 如果感兴趣蛋白分子量大于180kD，是否需要改变转印条件？

  转印条件及缓冲液在不同的实验中存在差异，需根据具体实验内容对其进行优化调整，当蛋白分子量超过180kDa时，使用20%的MeOH，并添加 0.05%的SDS，在转印时间上尝试1A转印1小时。相关服务:蛋白质免疫印迹和电转移服务

• • 2D WB和1D WB一样有效吗？

  当然，而且2D效果更好，因为聚集在1D带中的蛋白质通过等电聚焦在2DE中进一步扩散。2D WB非常敏感且信息丰富。相关服务:蛋白质免疫印迹和电转移服务