免疫印迹有哪些检测方法?
蛋白质印迹检测有三种不同的方法:化学发光法、化学荧光法和荧光法。化学发光是较常用的检测方法,通过酶(如辣根过氧化物酶HRP)和化学发光分子(如鲁米诺)之间发生的化学反应发光,这种发光可以用CCD成像仪检测。化学荧光是一种结合荧光和化学发光的分子生物学和生物化学的替代标记和检测方法。化学发光基于酶反应产生光,而化学荧光将荧光分子附着在二级或三级抗体上,通过光源激发。荧光法涉及使用与荧光分子(荧光团)结合的二级抗体。荧光团被光源激发时会释放光子,当被激发的分子返回到正常状态就会以光的形式被检测到。荧光团发出的光是连续的,并且与膜上的蛋白含量成正比。使用荧光法的优点之一是能够同时检测同一个印迹上的多个目标蛋白,从而能够检测同一印迹上正常化和感兴趣的蛋白质。
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