蛋白分析FAQ汇总

• • 质谱数据用于描述样品中蛋白质丰度的单位是什么？

  MS数据像其他光谱和色谱数据一样，通常通过将峰面积（以任意单位）与定量标准品的峰面积进行比较来量化。因此，Y轴只是信号的强度，通常不显示其直接实验读数单位。相关服务:蛋白质质谱鉴定

• • 在制备LC-MS/MS样品过程中，使用还原剂会使氧化蛋氨酸还原吗？

  蛋氨酸氧化与半胱氨酸氧化不同，在没有专用酶或催化剂的作用下是不可逆的。TCEP和DTT都不能减少蛋氨酸氧化情况。相关服务:蛋白质质谱鉴定

• • 在LC-MS/MS样品制备和上机分析过程中是否会发生蛋氨酸氧化？

  样品制备过程中蛋氨酸发生体外氧化是LC-MS/MS分析中一个十分常见的问题，大多数体外氧化发生在肽消化过程以及电喷雾电离过程中。相关服务:蛋白质质谱鉴定

• • 为什么要将蛋白质消化成肽进行液相色谱-质谱分析，而不是直接分析蛋白质？

  虽然质谱仪可以测量完整蛋白质的质量，但在蛋白质组学中分析肽而不是蛋白质的原因有很多：1、蛋白质可能难以处理，并且在相同的条件下可能并不都是可溶的。2、此外，质谱仪对蛋白质的灵敏度远低于对肽的灵敏度，并且蛋白质可能被处理和修饰，使得组合效应使得无法确定许多所得同种型的质量。此外，从序列中预测成

• • 什么是蛋白免疫印迹（Western Blot）？

  蛋白质免疫印迹是细胞和分子生物学中一种流行的技术，用于检测从细胞或组织中提取的特定蛋白质的存在。相关服务:蛋白质免疫印迹和电转移服务

• • 如何选择蛋白印迹使用的膜？

  在选择膜时，要考虑膜的类型以及孔径等因素。与硝化纤维素膜（80-100mg/cm2）相比，PVDF膜具有更大的蛋白质结合能力（170-200mg/cm2），因此PVDF更适合用于检测低丰度的蛋白质，但使用此膜可能会导致更高的背景。PVDF和硝化纤维素膜的典型孔径为0.1、0.2或0.45mm

• • 免疫印迹有哪些检测方法？

  蛋白质印迹检测有三种不同的方法：化学发光法、化学荧光法和荧光法。化学发光是较常用的检测方法，通过酶（如辣根过氧化物酶HRP）和化学发光分子（如鲁米诺）之间发生的化学反应发光，这种发光可以用CCD成像仪检测。化学荧光是一种结合荧光和化学发光的分子生物学和生物化学的替代标记和检测方法。化学发光基

• • 你们能进行从头测序吗？

  可以。 使用产生高质量精度的前体（肽）和产物（肽片段）离子的仪器，可实现高质量的从头测序。因此，我们将在 QExactive 上运行此类样本。然后，最好使用 Peaks 7 9BSI 处理数据文件，它在从离子系列中重建肽序列方面做得非常出色。 然而，即使有一套完整的胰蛋白酶肽，完全测序，也仍

• • 无标记（label-free）定量是否可行？

  这是一个棘手的问题。 质谱不是一种本质上的定量方法，且很难预测分析物与仪器中信号强度之间的关系。 在将一组肽离子引入仪器时，这显而易见。例如，在 MALDI-TOF 上，已知赖氨酸终止的肽比精氨酸终止的肽发出的信号要弱得多（这个问题有办法解决）。当将复杂的肽混合物电喷射到仪器的源中时，一些肽

• • FT-IR——什么是化学成像？

  化学成像是在二维或三维图像中对样品的化学性质进行空间解析的一种方法。使用这种技术，可以获得有关被检查样品的材料特性、结构和来源的信息。相关服务:蛋白质质谱鉴定