蛋白分析FAQ汇总

• • 在蛋白质印迹中应该使用哪种膜？

  建议使用硝化纤维素膜。虽然可以使用PVDF和其他类似的膜，但它们有时会导致背景增加。相关服务:蛋白质免疫印迹和电转移服务

• • WB应选择哪种封闭缓冲液？

  建议使用1X TBS、5%牛奶或0.05%吐温-20。封闭反应在室温下进行30-60min或在4℃下过夜。相关服务:蛋白质免疫印迹和电转移服务

• • WB实验中如何稀释一抗？

  可以根据一抗的说明书进行稀释，如果没有相关信息，可以对相关的阳性和阴性对照进行连续滴定。相关服务:蛋白质免疫印迹和电转移服务

• • 为什么实际的蛋白质印迹带大小与预测的不同？

  蛋白质印迹是一种按大小分离蛋白质的技术。一般来说，蛋白质越小，它通过SDS凝胶迁移的速度就越快。但是，迁移速度也受其他因素的影响，因此观察到的实际波段大小可能与预测的大小不同。比如：1、翻译后修饰-磷酸化和糖基化等，这就增加了蛋白质的大小；2、翻译-大多数蛋白质被合成为促蛋白，然后切割以产生

• • 为什么蛋白质印迹的信号微弱或根本没有信号？

  可能的原因有抗体浓度不够、抗体失效、冻干抗体溶解度不够或者被检测的组织/细胞没有不含有目标蛋白等。相关服务:蛋白质免疫印迹和电转移服务

• • 如果感兴趣蛋白分子量大于180kD，是否需要改变转印条件？

  转印条件及缓冲液在不同的实验中存在差异，需根据具体实验内容对其进行优化调整，当蛋白分子量超过180kDa时，使用20%的MeOH，并添加 0.05%的SDS，在转印时间上尝试1A转印1小时。相关服务:蛋白质免疫印迹和电转移服务

• • 2D WB和1D WB一样有效吗？

  当然，而且2D效果更好，因为聚集在1D带中的蛋白质通过等电聚焦在2DE中进一步扩散。2D WB非常敏感且信息丰富。相关服务:蛋白质免疫印迹和电转移服务

• • 2D WB凝胶最多能承载多少蛋白样品？

  一般来说，对于复杂样品，如SF凝胶上的细胞裂解物，考马斯蓝或Sypro ruby染色的最大负荷为200μg，银染的最大负载为50μg。考马斯蓝和银染的复杂样品（如细胞裂解物）的蛋白质浓度应分别为5mg/ml和1mg/ml，因为可装载的最大体积为50μl。对于LF凝胶，考马斯蓝和Sypro r

• • 如何识别2D WB凝胶上的感兴趣蛋白？

  蛋白质鉴定通常采用质谱法（LC-MS/MS）。考马斯蓝染色凝胶上的任何多肽斑点，无论多么微弱，都可以通过质谱鉴定。银染凝胶上的蛋白质也可以识别。相关服务:蛋白质免疫印迹和电转移服务

• • 想对蛋白质进行脱糖基化并通过LC-MS对其进行分析，如何化学地对细胞的蛋白质组进行去糖基化？

  N-链糖基化可通过用N糖苷酶F处理来去除。相关服务:糖组学分析服务