蛋白分析FAQ汇总

• • 初始成像后可以将荧光团存储在-20℃吗？冷冻后荧光团是否稳定？

  荧光团在膜上通常是稳定的（最多3个月），但不建议冷冻储存。可以将薄膜干燥，并将其避光室温储存（在滤纸或铝箔包裹的薄纸之间）。相关服务:蛋白质免疫印迹和电转移服务

• • 一级和/或二级抗体需要较小浓度的荧光检测吗？

  荧光检测与用于高灵敏度化学发光试剂相比需要更高浓度的一级和二级抗体。最佳稀释度因抗体而异，取决于样品中目标蛋白的含量。相关服务:蛋白质免疫印迹和电转移服务

• • 可以使用多少次之前制备的稀释的一级和二级抗体？

  抗体溶液建议最好现配现用。至少要保证不重复使用二级抗体。对于一级抗体，如果没有污染可以重复使用。相关服务:蛋白质免疫印迹和电转移服务

• • 是否存在一抗与荧光团偶联的这种事情？如果存在这种情况，是否意味着二抗不再有用？

  有一些用荧光基团标记的一抗可用，当然也可以标记一抗，如果使用标记的原代Ab，则不需要任何二抗。相关服务:蛋白质免疫印迹和电转移服务

• • 在使用一种以上一抗的情况下，一抗或二抗孵育的顺序是什么？它们是一次孵化一个还是一次全部孵化？

  可以同时孵育两种抗体，这样可以节省时间，也可以逐个进行。相关服务:蛋白质免疫印迹和电转移服务

• • 化学发光检测是否有可能同时探测靶标和管家蛋白？

  如果靶蛋白和管家蛋白具有非常不同的分子量并且分离良好并给出非常清晰的条带，则是可能的。相关服务:蛋白质免疫印迹和电转移服务

• • 如果每个印迹都有标准曲线，是否有助于提高化学发光测定的定量准确性？

  是的，如果对蛋白质做一个标准曲线，那么可以做一个更直接的定量。需要注意的是必须在与样品相同的膜上绘制标准曲线，因为信号强度值在印迹之间会根据化学发光特性而变化。相关服务:蛋白质免疫印迹和电转移服务

• • 一般蛋白印迹都是采用SDS-PAGE，但如果在转膜前进行2D-GE分离应该怎么做？

  可以使用迷你尺寸的凝胶如7cm的IPG条状凝胶进行1D分离，再使用2孔迷你凝胶进行2D分离。相关服务:蛋白质免疫印迹和电转移服务

• • 剥离膜会不会丢失蛋白质从而导致定量和归一化不太准确？

  剥离膜确实会丢失蛋白质，但是这种丢失不是针对某一种蛋白，而是膜上的全部蛋白，并且由于定量是相对定量，因此可能不会产生太大的影响。相关服务:蛋白质免疫印迹和电转移服务

• • 哪种类型的SDS-PAGE凝胶适合分析具有各种尺寸的糖基化蛋白质样品，以准备在定量前进行提取？

  糖基化蛋白质很难很好地分离。糖基化导致尺寸异质性，继而导致难以避免的垂直宽带和垂直条纹。建议使用宽范围的梯度凝胶，例如4-20%，如果样品蛋白质的分子量相差比较大，可以试试8-16%。相关服务:基于SDS-PAGE的蛋白分离