到目前为止,还没有为质谱工作跑 SDS-PAGE。跑凝胶时应该采取哪些预防措施以获得最佳结果?
我们的建议有以下几个方面; a) 清洁整个凝胶运行装置,在所有步骤中使用新手套,并在整个过程中保持表面清洁!!! b) 使用新鲜制备的缓冲液,染色剂不要重复使用。 c) 将样品加到凝胶上时,样品要与任何其他对照(如全细胞裂解物等,如果有的话)隔离,以避免交叉污染。最好在单独的凝胶中跑样品,与对照有足够的间隙(2-3 个泳道)。如果您希望所有样品跑一块凝胶,请在样品和对照之间保持 2-3 个泳道的间隙。永远不要让泳道空着,而是加相似体积的上样缓冲液。这将有助于精细的流线型样品带。 d) 您须记录总蛋白上样量(向我们提供信息) e) 染色凝胶并拍摄图像。(向我们提供信息) f) 仅在成像后剪条带。使用新的无菌一次性刀片在层流罩中的干净表面上切割必要的条带。 g) 将条带悬浮在质谱级水中放于干净ep管中提供给我们。
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