蛋白分析FAQ汇总

• • 如果要转移小蛋白质，我应该在转膜缓冲液中平衡凝胶多长时间？

  建议将凝胶在转膜缓冲液中平衡至少10-15分钟。与用于较大蛋白质的转移相比也可以在更短的时间内进行转膜。相关服务:蛋白质免疫印迹和电转移服务

• • 我对蛋白质的定量和/或表达水平感兴趣。你们能定量在溶液中的蛋白质或多肽吗？

  我们可以分析通过 SILAC、ICAT、ITRAQ 或其他同位素标记策略制备的蛋白质样品。我们还拥有出色的定量数据处理软件（ProteoIQ；NuSep）。此外，我们可以使用重同位素标记的合成肽标准品对您样品中的多肽和蛋白质进行定量。我们很高兴讨论您的蛋白质组学定量项目。相关服务:定量蛋白组

• • 为了使凝胶内蛋白质鉴定成功，需要多少蛋白质？

  通常，如果您在用蓝色染料染色后在凝胶上看到任何蛋白质条带的迹象，我们将能够成功鉴定蛋白质。但银染条带可能不行，如果蛋白质的实际含量在低飞摩尔范围。然而，我们通常可以成功地从银染凝胶条带中鉴定出蛋白质。相关服务:蛋白胶点、胶条、IP样品蛋白质鉴定

• • 蛋白质鉴定需要多少蛋白质？

  对此没有一个确切的答案，因为它取决于几个因素。一般来说，如果你能在凝胶上看到它，我们就可以鉴定这个蛋白质。如果蛋白质鉴定样品是溶液，它将在很大程度上取决于溶液的纯度、溶液的复杂性、是否接触去污剂和聚合物、是否接触蛋白酶抑制剂、蛋白质的量等等。原则上，LTQ-FT 的灵敏度在attomole范

• • 如何准备用于翻译后修饰分析的复杂混合物样品（如细胞系/组织）？

  对于深度磷酸化蛋白质组学，样品制备通常由客户进行，并且在磷酸化富集前或后将消化蛋白质直接提交用于的 LC-MS / MS 分析。我们可根据您的特定需求提供样品制备。请在提交样品之前与我们联系以讨论您的需求。 仅 LC-MS/MS 分析：我们要求每个样品至少 5 μg 磷酸化蛋白。注意：在分析

• • 如何准备用于非变性质谱（Native MS）分析的样品？

  我们要求至少20 μL样品，浓度为20 μM，在质谱分析之前需要脱盐，我们提供这项服务。对于蛋白质-配体测量，请分别提供蛋白质和配体以及结合亲和力/比率的估计值，以便混合分析物以确保复合物的形成。 注意：PEG，甘油和洗涤剂不适合质谱分析，在提交样品之前必须去除。我们可以尝试对较低体积/浓度

• • 如何准备用于定量蛋白组学分析的样品？

  对于定量蛋白质组学，样品制备通常由客户进行，并且提交的消化蛋白质直接用于LC-MS/MS分析。我们可根据您的特定需求提供样品制备。请在提交样品之前与我们联系以讨论您的需求。 对于LC-MS/MS分析，我们要求每个样品至少5μg。在消化之前必须准确测量蛋白质浓度。注意：在分析之前必须执行脱盐步

• • 什么是2D DIGE？

  双向荧光差异凝胶电泳（2D DIGE）有助于蛋白质组（样品中的所有蛋白质）的比较，以确定特定蛋白质水平的差异。在 2D DIGE 中，单个凝胶上可运行两个或多个样品。在电泳之前，每个样品中的蛋白质都用不同的荧光标签标记。然后将得到的2D凝胶在每个荧光团最优的激发和发射条件下成像，为每个样品生

• • 2D DIGE在蛋白质组学中有什么作用？

  2D凝胶电泳是蛋白质组学研究的一个核心工具。传统的聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）按大小分离蛋白质；然而，2D PAGE增加了一个额外的步骤，其中蛋白质首先通过等电点分离。 在得到的二维分布中，可以区分多达10000个蛋白质，从而提供样品蛋白质组的概述。比较生物样本之间的蛋白质组具有强大的科学

• • 2D DIGE会进行哪些数据分析？

  2D DIGE实验包括对每个图像进行归一化，识别蛋白质斑点，匹配不同样品中代表相同蛋白质的斑点，量化每个斑点的强度，以及计算每个斑点在被比较样品之间的强度比。代表相同蛋白质的斑点之间强度的差异表明了样品之间蛋白质丰度的变化。相关服务:2D-DIGE定量蛋白质组学