蛋白分析FAQ汇总

• • 在多重检测的情况下，直接标记第三抗体的最佳（和最简单）方法是什么？

  如果有合适的二级Ab可用，建议标记该二级Ab。在蛋白质高度表达的情况下，也可以标记初级抗体。当只有一个初级抗体时，信号会变弱，因为没有从次级抗体获得放大效果（几个次级抗体与每个初级抗体结合）。相关服务:蛋白质免疫印迹和电转移服务

• • cy染料标记定制抗体是否会影响其有效性/反应性？

  当进行标记时，重要的是在蛋白质和CyDye量之间保持正确的平衡，以获得对蛋白质（IgG）影响最小的有效标记。标记试剂盒和方案的设计对抗体性能的影响最小，只要遵循有关蛋白质和CyDye量的建议，就不会对抗原-抗体结合产生任何负面影响。相关服务:蛋白质免疫印迹和电转移服务

• • 初始成像后可以将荧光团存储在-20℃吗？冷冻后荧光团是否稳定？

  荧光团在膜上通常是稳定的（最多3个月），但不建议冷冻储存。可以将薄膜干燥，并将其避光室温储存（在滤纸或铝箔包裹的薄纸之间）。相关服务:蛋白质免疫印迹和电转移服务

• • 一级和/或二级抗体需要较小浓度的荧光检测吗？

  荧光检测与用于高灵敏度化学发光试剂相比需要更高浓度的一级和二级抗体。最佳稀释度因抗体而异，取决于样品中目标蛋白的含量。相关服务:蛋白质免疫印迹和电转移服务

• • 可以使用多少次之前制备的稀释的一级和二级抗体？

  抗体溶液建议最好现配现用。至少要保证不重复使用二级抗体。对于一级抗体，如果没有污染可以重复使用。相关服务:蛋白质免疫印迹和电转移服务

• • 是否存在一抗与荧光团偶联的这种事情？如果存在这种情况，是否意味着二抗不再有用？

  有一些用荧光基团标记的一抗可用，当然也可以标记一抗，如果使用标记的原代Ab，则不需要任何二抗。相关服务:蛋白质免疫印迹和电转移服务

• • 在使用一种以上一抗的情况下，一抗或二抗孵育的顺序是什么？它们是一次孵化一个还是一次全部孵化？

  可以同时孵育两种抗体，这样可以节省时间，也可以逐个进行。相关服务:蛋白质免疫印迹和电转移服务

• • 化学发光检测是否有可能同时探测靶标和管家蛋白？

  如果靶蛋白和管家蛋白具有非常不同的分子量并且分离良好并给出非常清晰的条带，则是可能的。相关服务:蛋白质免疫印迹和电转移服务

• • 如果每个印迹都有标准曲线，是否有助于提高化学发光测定的定量准确性？

  是的，如果对蛋白质做一个标准曲线，那么可以做一个更直接的定量。需要注意的是必须在与样品相同的膜上绘制标准曲线，因为信号强度值在印迹之间会根据化学发光特性而变化。相关服务:蛋白质免疫印迹和电转移服务

• • 一般蛋白印迹都是采用SDS-PAGE，但如果在转膜前进行2D-GE分离应该怎么做？

  可以使用迷你尺寸的凝胶如7cm的IPG条状凝胶进行1D分离，再使用2孔迷你凝胶进行2D分离。相关服务:蛋白质免疫印迹和电转移服务