蛋白分析FAQ汇总

• • 为什么MS中使用稳定同位素标记而不是放射性同位素标记？

  放射性同位素是那些通过α、β、γ、电子俘获、正电子发射等衰变的同位素。除了纯γ发射体外，其他所有发射体都会在这一转变过程中改变化学特性和质量。相关服务:定量蛋白组分析

• • 如果想寄送凝胶样品，应该使用什么类型的凝胶？

  许多类型的凝胶都与质谱分析兼容，例如传统的聚丙烯酰胺凝胶和许多商业预制凝胶，包括 Thermo NuPAGE Bis-Tris 和 Tris-Acetate 凝胶。对于蛋白质鉴定，我们没有观察到由不同凝胶引起任何显著影响。然而，根据我们的经验，我们建议不要使用 Tricine 凝胶进行蛋白质

• • 如何从凝胶中切出蛋白条带？

  当你从凝胶上切蛋白质条带时应该小心。第一，避免凝胶直接接触裸手或任何潜在的脏表面。第二，全程戴干净的手套，将凝胶放在超净塑料盒上。第三，用合适大小的超净刀片切出感​​兴趣的蛋白质条带。如果您需要切出多个条带，请避免对不同的凝胶条带标记错误。相关服务:蛋白胶点、胶条、IP样品蛋白质鉴定

• • 什么是质谱？

  质谱（Mass Spectrometry，简称 MS）测量样品中一种或多种分子的质荷比。各种质谱分析技术可用于确定分子的确切分子质量，提供有关化合物的组成和结构信息，并可用于简单或复杂混合物中的化合物的定量。相关服务:蛋白质质谱鉴定

• • 什么是 MRM？

  多反应监测 （MRM，也称为选择性反应监测 （SRM）） 是一种特异和灵敏的质谱技术，可准确定量目标蛋白质。利用有同位素标记的内标，该技术可以在单一液相色谱串联质谱 （LC-MS/MS） 实验中对复杂系统中的大量蛋白质进行有针对性的绝对定量。相关服务:MRM/PRM定量蛋白组学分析

• • “自下而上”和“自上而下”蛋白质组学有什么区别？

  质谱分析蛋白质，例如在 HDX 实验中，可以使用两种不同的方法进行：“自下而上”和“自上而下”蛋白质组学。在自下而上的实验中，蛋白质被特定蛋白酶（例如胰蛋白酶）消化成肽段，肽段通过液相色谱分离，然后在质谱仪上分析。然后将收集到的所有肽段的信息与已知的氨基酸序列进行比对，从而提供目标蛋白质的高

• •  到目前为止，还没有为质谱工作跑 SDS-PAGE。跑凝胶时应该采取哪些预防措施以获得最佳结果？

  我们的建议有以下几个方面； a) 清洁整个凝胶运行装置，在所有步骤中使用新手套，并在整个过程中保持表面清洁！！！ b) 使用新鲜制备的缓冲液，染色剂不要重复使用。 c) 将样品加到凝胶上时，样品要与任何其他对照（如全细胞裂解物等，如果有的话）隔离，以避免交叉污染。最好在单独的凝胶中跑样品，与

• • 提供物种信息有多重要？

  物种信息是自下而上蛋白质组学工作流程的核心，用于识别目标蛋白质。因此，如果您知道物种/属/有机体，请在服务申请表上提供信息。如果您知道但由于保密问题而无法共享此信息，我们将在 Swissprot 数据库中对您的结果进行一般搜索，并为您提供蛋白质列表。如果您知道您的蛋白质来自未注释的生物体，请

• • 可以寄银染凝胶吗？

  我们更喜欢考马斯染色凝胶，但接受用质谱兼容的银染料染色的凝胶。通过我们之前的经验，银染凝胶通常不会比考马斯染色凝胶获得更好的结果。这可能归因于由于过程中使用的显影剂（例如甲醛和戊二醛等）引起的蛋白质内和蛋白质与凝胶的交联。相关服务:蛋白胶点、胶条、IP样品蛋白质鉴定

• • 我对蛋白质的翻译后修饰很感兴趣。我可以通过质谱获得我的蛋白质的完整序列覆盖吗？

  大多数蛋白质很难完全覆盖。这取决于良好消化蛋白质的能力，可能受到蛋白质折叠、蛋白酶切位点和样品复杂性的影响。丰度、纯度、蛋白质序列、疏水性和抑制消化的蛋白质修饰（如糖基化）等都会影响覆盖率。使用不同的酶和使用多种策略分析蛋白质将增加覆盖率。相关服务:翻译后修饰蛋白组分析