蛋白分析FAQ汇总

• • 与基于凝胶的技术相比，基于溶液的蛋白质组分析有什么优势？

  如果您的样品复杂程度较低，我们建议您在 SDS-PAGE 凝胶上运行它们，以去除污染物和质谱干扰物质。只需短时间运行，让蛋白质混合物进入浓缩胶并浓缩为一个粗条带。但并非所有蛋白质都能在 SDS-PAGE 凝胶中得到很好的分离，尤其是膜蛋白。如果您使用与蛋白质组学兼容的裂解缓冲液制备复杂的细胞

• • 接近 100% 的同位素掺入细胞蛋白质组所需的典型标记周期是多少？

  几乎完全重同位素掺入所需的细胞倍增次数通常为 5-6。许多细胞系（例如，HeLa、HEK293）已经证明了这一点。相关服务:基于SILAC/Dimethyl标记的定量蛋白组分析

• • 在 SILAC-MS 实验中如何防止 L-Arg 转化为 L-Pro？

  应该采取一些程序性措施来帮助减少这种不利的代谢反应。有关执行 SILAC-MS 实验的最佳实践的设计说明和提示/技巧，请参考 Mann 等人的Nature Protocols文章 ( PMID: 17406521 )。相关服务:基于SILAC/Dimethyl标记的定量蛋白组分析

• • 三重SILAC 实验中通常使用哪些稳定同位素标记试剂？

  三重 SILAC-MS 实验通常使用以下三种同位素标记状态的 L-Lys 和 L-Arg：1）light(L)， 未标记的 L-Arg (ULM-8347) 和未标记的 L-Lys (ULM-8766)；2）medium (M)， 13C6 L-Arg (CLM-2265) 和 D4 L-

• • 什么是自下而上的定量蛋白质组学工作流程？

  自下而上的蛋白质组学是一种常见的基于质谱的工作流程，用于鉴定和定量给定样品中的蛋白质，通过分析蛋白质酶切产生的独特肽段进行。 相关服务:定量蛋白组分析

• • 我可以分析什么样的样品？

  我们主要是一家蛋白质组学机构，因此您能想到的任何蛋白质质谱实验，我们都可以为您提供帮助：凝胶斑点，磷酸化，泛素化，比较样品中的所有蛋白质，SILAC，iTRAQ, TMT，二甲基化，TAILS，定量，蛋白质复合物的免疫沉淀， 二硫化物排列，翻译后修饰。 我们还为化学家运行了一个仪器，这样他们

• • 可以检测重组蛋白吗？

  是的。我们有一个专门的质谱仪来分析完整蛋白质。在 50,000 Da 蛋白质上它精确到约 0.5 道尔顿。该仪器能够发现重组蛋白中的单个二硫键。因此，您不仅可以检查是否表达了正确的蛋白质，还可以获得在 SDS-PAGE 凝胶上永远看不到的结构信息。此外，它比运行凝胶更快。分析一个完整的蛋白质

• • 可以检测化学合成吗？

  是的。我们有专门的质谱仪供化学组测试他们的合成产品。质量精度到小数点后两位。如果您想知道机器是如何工作的，那么我们可以解释，但大多数人只想要结果。我们可以向您展示如何打开预制方法并加载样本，然后按“开始”按钮。相关服务:蛋白分析

• • 质谱 (MALDI) 无法获得蛋白质准确的分子质量的可能原因是什么？

  与SDS PAGE显示的质量不同，可能是因为SDS PAGE的准确性的问题。也可能是由于提取方法或基质导致蛋白质破裂。相关服务:蛋白分子量测定

• • MALDI-MS鉴定出的一些蛋白质的序列覆盖率值较低(<30%)，肽质量指纹识别的序列覆盖率是否有标准可接受的值？

  这需要考虑您正在分析的样本是属于模式生物还是非模式生物，因为这会极大地改变游戏规则——尤其是当您正在运行针对数据库进行肽匹配的自动化算法时。相关服务:蛋白质质谱鉴定