蛋白分析FAQ汇总
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需要,因为梯度系统可以控制流速和溶剂/缓冲液的变化,以改进色谱分离。 它们可用于锐化分离和加速色谱柱的重新平衡。相关服务:蛋白质质谱鉴定
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需要尽可能多的去除干扰化合物:如蛋白质沉淀、脂质提取物、过滤或去除细胞和微粒。一些样品需要浓缩,有利于检测稀释样品中的各组分。相关服务:蛋白质质谱鉴定
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• LC-MS分析需要HPLC级溶剂和水吗?需要过滤样本吗?
答案都是肯定的!HPLC级水是最重要的成分。由于非极性有机污染物的共蒸馏,用于HPLC的三重蒸馏水破坏了许多色谱操作,因此必须使用HPLC级溶剂和色谱柱。未经过滤的样品会导致注射器和柱玻璃料堵塞。预混合后过滤流动相将减少泵止回阀和管路的磨损和停机时间。相关服务:蛋白质质谱鉴定
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每种类型的色谱方法都有不同的用途。色谱法的多样性使高效液相色谱具有多功能性。大约80%的分离是利用5-10µm反相色谱完成的。反相色谱可对多种化合物进行高分辨率分离,并可在水流动相中运行。离子交换分离色谱需要盐溶液进行分离,而这在质谱联用中并不常见。尺寸分离色谱具有较低的分辨率和较长的运行时
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每种接口在LC/MS中都各有其用途。离子喷雾最适合中性和非极性化合物;电喷雾最好用于电离极性材料,如蛋白质;纳米喷雾经过优化,能够从微流柱中为极性化合物提供最佳的离子生成,特别是当只有微量样品可用时。相关服务:蛋白质质谱鉴定
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四极杆是第一个用于色谱分析的质谱仪,也是实验室系统的主要组成部分,并且价格最低。四极杆可以标记峰值分子量的色谱图。线性离子阱分析仪是最灵活的,允许您确定简单的分子量以及前体和产品碎片研究。它们还可以存储足够的离子,为痕量分析提供良好的灵敏度,并可以捕获特定离子进行碎片分析。对于大分子蛋白研究
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因为APCI接口产生低能离子,通常不会分裂分子离子。在GC-MS中发生碎片化是因为它使用70eV电压使样品电离,而该能量通过分子离子击穿产生碎片。在MS/MS中,离子撞击大气体分子产生的碰撞能量导致碎片化。相关服务:蛋白质质谱鉴定
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• 做蛋白质分离选择MALDI-TOF还是LC-MS/MS?
可能需要结合这两种系统。MALDI-TOF-MS系统用于分析凝胶电泳条带中的蛋白质和胰蛋白酶化肽。如果您正在研究PTM蛋白质,可能需要进行前体和产物扫描以确认肽的身份。相关服务:蛋白质质谱鉴定
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LC-MS系统将为您提供柱峰色谱图,并可提供分离材料及其溶剂络合物的分子量。LC-MS/MS系统将更加昂贵,但可以提供结构信息以确认所分离化合物的特性。相关服务:蛋白质质谱鉴定
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对于任何统计数据,3 个生物学重复是最少的,5 个更好,以防 1-2 变坏。相关服务:组学分析
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