蛋白分析FAQ汇总

• • 如何识别2D WB凝胶上的感兴趣蛋白？

  蛋白质鉴定通常采用质谱法（LC-MS/MS）。考马斯蓝染色凝胶上的任何多肽斑点，无论多么微弱，都可以通过质谱鉴定。银染凝胶上的蛋白质也可以识别。相关服务:蛋白质免疫印迹和电转移服务

• • 想对蛋白质进行脱糖基化并通过LC-MS对其进行分析，如何化学地对细胞的蛋白质组进行去糖基化？

  N-链糖基化可通过用N糖苷酶F处理来去除。相关服务:糖组学分析服务

• • 为什么SDS-PAGE检测到的蛋白Shotgun蛋白质组学没有鉴定到？

  可能是由于某些蛋白组分的丰度较低，因此质谱未坚定到。此外，还可以考虑对蛋白质组进行溶液内消化（跳过SDS-PAGE电泳），并通过LC-MS分析所得的肽混合物。相关服务:Shotgun鸟枪法蛋白质鉴定

• • 哪种类型的高分辨质谱最适合蛋白质组学研究？

  总的来说，四级杆TOF质谱和Orbitraps质谱比MALDI-TOFs的分辨率更高。质谱仪的分辨率固然重要，但蛋白样品的质量也是影响实验结果的重要原因，如蛋白的成功提取和富集、一致的蛋白水解消化、充分分离产生的肽以最大限度地减少共洗脱等。相关服务:蛋白质组学分析

• • 2D-DIGE和液相色谱法谁更适合研究生物体蛋白质组的变化？

  这一问题没有统一的答案，因为不同的方法适用性不同。要根据实际情况进行选择。比如你预计蛋白质水平（数量和水平）会发生什么样的变化？由于DiGE提供了样品的可视化并使用了内部标准，因此使用此方法可能更容易识别（小）变化。当然后续仍需要切除感兴趣的点来识别相应的蛋白质。其次你有多少材料可供分析？D

• • SILAC与iTRAQ谁更适合用于定量分析酵母蛋白质组？

  二者各有优势，也有缺点，应根据实验侧重点进行选择。SILAC的优势：1、将差异标记的蛋白质合并并加工在一起，最大限度地减少由于处理错误引起的偏倚；2、氨基酸修饰介质不影响细胞的代谢过程；3、定量很简单，因为预先知道肽与其较重版本之间的预期质量差；4、在SILAC培养基中培养5-6代后，体内标

• • 是否可以使用冻干血浆进行“组学”分析？

  当然可以，冻干样品稳定性强，易于储存和运输，也具有一定的富集作用。相关服务:组学分析

• • 什么是Edman降解？

  Edman降解是一种蛋白质测序方法，通过Edman降解进行N端测序是传统的蛋白质测序方法，在蛋白质分析方面仍具有其他分析方法不易获得的优点。埃德曼降解是一种循环过程：N端氨基酸残基被标记后从肽或蛋白质中切割掉，并通过色谱法鉴定。通常，蛋白质的N端氨基与苯基异硫氰酸酯反应形成苯基硫代氨基甲酰基

• • Edman降解法的特征是什么？

  Edman测序的灵敏度不是很高，需要几皮摩尔蛋白或纯化蛋白来获得确定的序列信息。Edman测序的一个重要特征是，在进行循环测序之前，蛋白分子N末端的α-氨基应未经任何化学修饰。理论上Edman测序可以获得整个肽或蛋白质的序列。然而在实践中，多种因素限制了可测的氨基酸数量。利用目前的技术可以从

• • 对于磷酸化蛋白质的蛋白质印迹，我可以使用1X PBST进行洗涤吗？

  不应使用 PBS-T对磷酸化蛋白进行印迹，而应改用TBS-T。相关服务:蛋白质免疫印迹和电转移服务