蛋白分析FAQ汇总

• • 如何利用WB分离和转移大于200kDa-265kDa的蛋白质？

  使用低浓度度SDS-PAGE凝胶，最好是4-8%的梯度凝胶。凝胶电泳的时间比通常对较小蛋白质运行的时间更长。在转膜缓冲液中加入0.1%SDS，以改善大蛋白从凝胶到膜的迁移。也可以将甲醇浓度降低到10%。与转移较小蛋白质相比，增加转膜时间。相关服务:蛋白质免疫印迹和电转移服务

• • 对于小蛋白质（<30 kDa）的半干转膜，哪种缓冲液效果最好？

  小蛋白转印的一般建议是20%甲醇，并且在转印缓冲液中不添加SDS。相关服务:蛋白质免疫印迹和电转移服务

• • 小分子量蛋白质转至0.2微米PVDF，掺入20%MeOH是否会改善其转印过程？

  20%MeO否会改善转印过程。相关服务:蛋白质免疫印迹和电转移服务

• • 如果要转移小蛋白质，我应该在转膜缓冲液中平衡凝胶多长时间？

  建议将凝胶在转膜缓冲液中平衡至少10-15分钟。与用于较大蛋白质的转移相比也可以在更短的时间内进行转膜。相关服务:蛋白质免疫印迹和电转移服务

• • 我对蛋白质的定量和/或表达水平感兴趣。你们能定量在溶液中的蛋白质或多肽吗？

  我们可以分析通过 SILAC、ICAT、ITRAQ 或其他同位素标记策略制备的蛋白质样品。我们还拥有出色的定量数据处理软件（ProteoIQ；NuSep）。此外，我们可以使用重同位素标记的合成肽标准品对您样品中的多肽和蛋白质进行定量。我们很高兴讨论您的蛋白质组学定量项目。相关服务:定量蛋白组

• • 为了使凝胶内蛋白质鉴定成功，需要多少蛋白质？

  通常，如果您在用蓝色染料染色后在凝胶上看到任何蛋白质条带的迹象，我们将能够成功鉴定蛋白质。但银染条带可能不行，如果蛋白质的实际含量在低飞摩尔范围。然而，我们通常可以成功地从银染凝胶条带中鉴定出蛋白质。相关服务:蛋白胶点、胶条、IP样品蛋白质鉴定

• • 蛋白质鉴定需要多少蛋白质？

  对此没有一个确切的答案，因为它取决于几个因素。一般来说，如果你能在凝胶上看到它，我们就可以鉴定这个蛋白质。如果蛋白质鉴定样品是溶液，它将在很大程度上取决于溶液的纯度、溶液的复杂性、是否接触去污剂和聚合物、是否接触蛋白酶抑制剂、蛋白质的量等等。原则上，LTQ-FT 的灵敏度在attomole范

• • 如何准备用于翻译后修饰分析的复杂混合物样品（如细胞系/组织）？

  对于深度磷酸化蛋白质组学，样品制备通常由客户进行，并且在磷酸化富集前或后将消化蛋白质直接提交用于的 LC-MS / MS 分析。我们可根据您的特定需求提供样品制备。请在提交样品之前与我们联系以讨论您的需求。 仅 LC-MS/MS 分析：我们要求每个样品至少 5 μg 磷酸化蛋白。注意：在分析

• • 如何准备用于非变性质谱（Native MS）分析的样品？

  我们要求至少20 μL样品，浓度为20 μM，在质谱分析之前需要脱盐，我们提供这项服务。对于蛋白质-配体测量，请分别提供蛋白质和配体以及结合亲和力/比率的估计值，以便混合分析物以确保复合物的形成。 注意：PEG，甘油和洗涤剂不适合质谱分析，在提交样品之前必须去除。我们可以尝试对较低体积/浓度

• • 如何准备用于定量蛋白组学分析的样品？

  对于定量蛋白质组学，样品制备通常由客户进行，并且提交的消化蛋白质直接用于LC-MS/MS分析。我们可根据您的特定需求提供样品制备。请在提交样品之前与我们联系以讨论您的需求。 对于LC-MS/MS分析，我们要求每个样品至少5μg。在消化之前必须准确测量蛋白质浓度。注意：在分析之前必须执行脱盐步