蛋白分析FAQ汇总

• • N端测序——可以分析液体形式的样品吗？

  可以，但是样品在运输前必须在微量离心管中冷冻干燥。样品应不含干扰缓冲液和盐。尽管可以耐受低浓度的 SDS（高达 0.3%）和 PBS，但含有伯胺的缓冲液，如 TRIS 和 HEPES，应该被去除。注意：Edman测序无法分析含有一种以上蛋白质的复杂样品。相关服务:基于Edman降解的蛋白N端

• • N端测序——需要多少蛋白质？

  对于纯蛋白质，灵敏度限值约为 1 pmol，但我们建议 10 pmol 以确保获得满意的结果。相关服务:基于Edman降解的蛋白N端序列分析

• • N端测序——如果蛋白质在 N 端被阻断了怎么办？

  不会获得任何序列信息。在这种情况下，唯一的选择是使用基于质谱的方法尝试内部测序。相关服务:基于Edman降解的蛋白N端序列分析

• • N端测序——可以检测到半胱氨酸吗？

  未经特殊修饰的半胱氨酸不能通过N端测序检测到，结果会是空白。样品必须被修饰以检测半胱氨酸。注意：样品应冷冻干燥或在溶液中。请说明您是否需要 Cys 分析。相关服务:基于Edman降解的蛋白N端序列分析

• • 氨基酸分析——样品在 PVDF 膜上可以吗？

  不可以，蛋白质必须冻干。相关服务:氨基酸组成分析

• • 如何克服WB转移不足或较差的问题？

  检查蛋白质的大小：如果蛋白质>180 kDa，那么需要通过以下方式优化转印条件：1、使用20%的MeOH；2、添加 0.05% SDS转印缓冲液；3、增加裂解物的加载量；4、在1A转移1小时。相关服务:蛋白质免疫印迹和电转移服务

• • 如何避免“斑点”或不均匀的蛋白质印迹？

  为避免在进行蛋白质印迹分析时出现“斑点”或不均匀的印迹，建议：1、延长封条时间以优化封迹效果；2、延长洗涤周期（这对于组织匀浆样品尤其重要）；3、在将奶粉添加到印迹中之前，请确保奶粉完全在溶液中；4、在去除一些抗体溶液之前，旋转含有抗体溶液的试管，以防蛋白质聚集体。相关服务:蛋白质免疫印迹和

• • 如何避免“斑块状”、不均匀的斑点出现在印迹上？

  为避免“斑块状”或印迹中出现不均匀的斑点，请尝试： • 检查用于细菌污染的所有缓冲液。 • 确保在抗体和洗涤孵育期间膜完全浸没。 • 在进行转印之前，梳理掉膜和凝胶之间的所有气泡。 • 通过将膜放在摇臂/摇床上，确保均匀接近整个印迹。 • 确保所有蛋白质印迹设备均已正确清洗。 • 过滤HRP

• • 蛋白印迹每泳道可以分析多少蛋白质？

  全细胞裂解物建议50ug，核酸提取物建议25ug。相关服务:蛋白质免疫印迹和电转移服务

• • 不同浓度的SDS-PAGE凝胶适合分离的多少分子量的蛋白样品？

  凝胶的浓度与其适合分离的蛋白分子量成反比，浓度越小的胶越适合分离大分子量的蛋白质样品。通常8%胶适合分离100kDa以上的蛋白；10%适合分离50-100kDa左右的蛋白；12%的凝胶适合分离14-15kDa左右的蛋白；50%的凝胶适合分离13kDa以下的蛋白样品。相关服务:基于SDS-PA