蛋白分析FAQ汇总

• • 为什么应该从切割 SDS-PAGE 中制备蛋白质样品用于质谱分析？

  SDS-PAGE 是一种在进行质谱分析之前用于降低样品复杂性的方法，可以提高鉴定潜在目标的效率。相关服务:蛋白质质谱鉴定

• • 过度使用胰蛋白酶对蛋白质组学实验有影响吗？

  如果胰蛋白酶以更高的浓度被使用，它的特异性会降低，并且倾向于在任何地方切割多肽。这会使蛋白质组学分析变得更加困难。相关服务:组学分析

• • N端测序——如何从凝胶中制备样品？

  蛋白质应被电泳转移到高质量（蛋白质测序级）PVDF 膜上。这些膜可从 Bio-Rad、Applied Biosystems、GE 和其他公司获得。膜应该用考马斯亮蓝染色，且目标条带必须肉眼可见。印迹必须不含任何颗粒材料。请从膜上切下条带，并将其与膜的影印件一起发送。请注意：此服务不能用于 S

• • N端测序——可以分析液体形式的样品吗？

  可以，但是样品在运输前必须在微量离心管中冷冻干燥。样品应不含干扰缓冲液和盐。尽管可以耐受低浓度的 SDS（高达 0.3%）和 PBS，但含有伯胺的缓冲液，如 TRIS 和 HEPES，应该被去除。注意：Edman测序无法分析含有一种以上蛋白质的复杂样品。相关服务:基于Edman降解的蛋白N端

• • N端测序——需要多少蛋白质？

  对于纯蛋白质，灵敏度限值约为 1 pmol，但我们建议 10 pmol 以确保获得满意的结果。相关服务:基于Edman降解的蛋白N端序列分析

• • N端测序——如果蛋白质在 N 端被阻断了怎么办？

  不会获得任何序列信息。在这种情况下，唯一的选择是使用基于质谱的方法尝试内部测序。相关服务:基于Edman降解的蛋白N端序列分析

• • N端测序——可以检测到半胱氨酸吗？

  未经特殊修饰的半胱氨酸不能通过N端测序检测到，结果会是空白。样品必须被修饰以检测半胱氨酸。注意：样品应冷冻干燥或在溶液中。请说明您是否需要 Cys 分析。相关服务:基于Edman降解的蛋白N端序列分析

• • 氨基酸分析——样品在 PVDF 膜上可以吗？

  不可以，蛋白质必须冻干。相关服务:氨基酸组成分析

• • 如何克服WB转移不足或较差的问题？

  检查蛋白质的大小：如果蛋白质>180 kDa，那么需要通过以下方式优化转印条件：1、使用20%的MeOH；2、添加 0.05% SDS转印缓冲液；3、增加裂解物的加载量；4、在1A转移1小时。相关服务:蛋白质免疫印迹和电转移服务

• • 如何避免“斑点”或不均匀的蛋白质印迹？

  为避免在进行蛋白质印迹分析时出现“斑点”或不均匀的印迹，建议：1、延长封条时间以优化封迹效果；2、延长洗涤周期（这对于组织匀浆样品尤其重要）；3、在将奶粉添加到印迹中之前，请确保奶粉完全在溶液中；4、在去除一些抗体溶液之前，旋转含有抗体溶液的试管，以防蛋白质聚集体。相关服务:蛋白质免疫印迹和