蛋白分析FAQ汇总

任何考马斯亮蓝染色条带都可以通过我们的高灵敏度质谱机器在 MS 和 MS/MS 水平上进行鉴定。如果蛋白质样品的浓度约 100 fmole/μl，则每条泳道上样 10μl 应该会产生每条泳道大约 1pmol 的蛋白质。>1 pmol 的蛋白质条带可以通过几种类型的染色剂（考马斯胶体、Zn、C

我们利用色谱梯度根据肽混合物的疏水性分离它们。这降低了肽混合物的复杂性，并在机器运行期间执行数千次 MS 和 MS/MS 扫描。在 MS/MS 测序之前，机器有足够的时间在离子阱中富集肽。通过这种方式，不仅蛋白质的覆盖率会增加，而且能比 MALDI-TOF/TOF 产生更好的质量数据。在 M

这实际上取决于实验类型。通常，我们使用 10-15 cm 长色谱柱时一次上样 0.5-1 µg 肽混合物，使用 50 cm 长色谱柱时上样 1-2 µg 肽混合物。如果蛋白质有足够的量，我们建议用胰蛋白酶消化至少 50 µg 蛋白质。请与我们讨论您的样品制备方案，以避免可能干扰蛋白质消化和质

如果您的样品复杂程度较低，我们建议您在 SDS-PAGE 凝胶上运行它们，以去除污染物和质谱干扰物质。只需短时间运行，让蛋白质混合物进入浓缩胶并浓缩为一个粗条带。但并非所有蛋白质都能在 SDS-PAGE 凝胶中得到很好的分离，尤其是膜蛋白。如果您使用与蛋白质组学兼容的裂解缓冲液制备复杂的细胞

几乎完全重同位素掺入所需的细胞倍增次数通常为 5-6。许多细胞系（例如，HeLa、HEK293）已经证明了这一点。相关服务:基于SILAC/Dimethyl标记的定量蛋白组分析

应该采取一些程序性措施来帮助减少这种不利的代谢反应。有关执行 SILAC-MS 实验的最佳实践的设计说明和提示/技巧，请参考 Mann 等人的Nature Protocols文章 ( PMID: 17406521 )。相关服务:基于SILAC/Dimethyl标记的定量蛋白组分析

三重 SILAC-MS 实验通常使用以下三种同位素标记状态的 L-Lys 和 L-Arg：1）light(L)，未标记的 L-Arg (ULM-8347) 和未标记的 L-Lys (ULM-8766)；2）medium (M)， 13C6 L-Arg (CLM-2265) 和 D4 L-

自下而上的蛋白质组学是一种常见的基于质谱的工作流程，用于鉴定和定量给定样品中的蛋白质，通过分析蛋白质酶切产生的独特肽段进行。相关服务:定量蛋白组分析

我们主要是一家蛋白质组学机构，因此您能想到的任何蛋白质质谱实验，我们都可以为您提供帮助：凝胶斑点，磷酸化，泛素化，比较样品中的所有蛋白质，SILAC，iTRAQ, TMT，二甲基化，TAILS，定量，蛋白质复合物的免疫沉淀，二硫化物排列，翻译后修饰。我们还为化学家运行了一个仪器，这样他们

是的。我们有一个专门的质谱仪来分析完整蛋白质。在 50,000 Da 蛋白质上它精确到约 0.5 道尔顿。该仪器能够发现重组蛋白中的单个二硫键。因此，您不仅可以检查是否表达了正确的蛋白质，还可以获得在 SDS-PAGE 凝胶上永远看不到的结构信息。此外，它比运行凝胶更快。分析一个完整的蛋白质

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