蛋白分析FAQ汇总

• • TMT-SRM相比基于抗体的方法来验证候选生物标记物的优势？

  TMT-SRM分析可以在一次分析中验证候选生物标志物，无需为Western Blotting或ELISA试剂盒购买多个抗体。且TMT-SRM特别适合验证没有商业抗体的蛋白质和翻译后修饰。相关服务:基于TMT的蛋白质组学分析

• • 串联质量标签（Tandem Mass Tag，TMT）试剂的主要用途是什么？

  TMT 技术被用于单独标记不同的蛋白质样品，以便将这些样品组合成单个样品进行 LC-MS 分析。该工作流程的主要优点是样品通量更高、仪器分析时间更少、重复之间肽定量的精度高，以及不同样品中缺失的定量蛋白质更少。相关服务:基于标签的蛋白质定量技术-iTRAQ，TMT，SILAC

• • 可以合并多少个样品同时进行多重蛋白质组质谱定量？

  SILAC 可用于同时分析2到3个样品。TMT 试剂可用于同时分析6至11个样品。TMTpro 试剂可用于同时分析多达16个样品。相关服务:定量蛋白组分析

• • 不同的质谱定量系统可以用于哪些样品类型？

  Label-free、TMT 试剂和 TMTpro 试剂可用于任何蛋白质样品类型。SILAC 和 Neucode 定量只能用于可进行代谢标记的细胞系和模型生物。相关服务:定量蛋白组分析

• • 可以将 TMT 试剂与 TMTpro 试剂结合使用吗？

  TMT 试剂和 TMTpro 试剂是具有不同质量的不同化学品。因此，不建议混合这两个标签，因为合并后的样本会更加复杂而导致定量的蛋白质更少。相关服务:基于标签的蛋白质定量技术-iTRAQ，TMT，SILAC

• • 与未标记的样品相比，TMT 标记的样品中的肽/蛋白质鉴定数量较少，这怎么办？

  建议对样品进行分馏，以降低 LC-MS 分析之前的样品复杂性，从而增加多重样品的可定量肽/蛋白质的数量。相关服务:基于标签的蛋白质定量技术-iTRAQ，TMT，SILAC

• • 样本 TMT 标记水平较低 (<95%)应该检查什么？

  通过使用 TMT/TMTpro 作为变量（即动态）修饰肽氨基末端和赖氨酸来搜索肽，可以确定单个标记样品的标记效率。对于大多数样品的完整标记，肽与标签的质量比（w:w）应为 1:4 至 1:8。TMT/TMTpro 试剂的不当储存或处理会导致标签上的 -NHS 基团水解，从而使试剂的反应性降低

• • SILAC 蛋白质中重氨基酸的掺入量很低，应该检查什么？

  我们建议验证没有轻赖氨酸（和/或精氨酸）和透析胎牛血清的 SILAC 培养基用于细胞培养。此外，验证培养的细胞在 SILAC 培养基中是不是健康的、有活力的、积极生长的，并且没有微生物污染。相关服务:基于标签的蛋白质定量技术-iTRAQ，TMT，SILAC

• • 有很好的肽识别号，但样品重复之间的差异很大。您对提高样品重现性有何建议？

  我们建议检查您的样品制备工作流程，以确保一致的蛋白质提取、还原/烷基化、消化和净化。建议进行高质量、可重复的样品制备流程。相关服务:蛋白分析

• • 什么是二维（2D）蛋白质凝胶电泳？

  2D 蛋白质凝胶电泳是蛋白质在二维空间上的分离。在第一维中，通过等电聚焦将蛋白质按等电点 (pI) 进行分离，在第二维中，通过 SDS-PAGE 将蛋白质按质量进行分离。相关服务:二维凝胶电泳服务