蛋白分析FAQ汇总

• • 与未标记的样品相比，TMT 标记的样品中的肽/蛋白质鉴定数量较少，这怎么办？

  建议对样品进行分馏，以降低 LC-MS 分析之前的样品复杂性，从而增加多重样品的可定量肽/蛋白质的数量。相关服务:基于标签的蛋白质定量技术-iTRAQ，TMT，SILAC

• • 样本 TMT 标记水平较低 (<95%)应该检查什么？

  通过使用 TMT/TMTpro 作为变量（即动态）修饰肽氨基末端和赖氨酸来搜索肽，可以确定单个标记样品的标记效率。对于大多数样品的完整标记，肽与标签的质量比（w:w）应为 1:4 至 1:8。TMT/TMTpro 试剂的不当储存或处理会导致标签上的 -NHS 基团水解，从而使试剂的反应性降低

• • SILAC 蛋白质中重氨基酸的掺入量很低，应该检查什么？

  我们建议验证没有轻赖氨酸（和/或精氨酸）和透析胎牛血清的 SILAC 培养基用于细胞培养。此外，验证培养的细胞在 SILAC 培养基中是不是健康的、有活力的、积极生长的，并且没有微生物污染。相关服务:基于标签的蛋白质定量技术-iTRAQ，TMT，SILAC

• • 有很好的肽识别号，但样品重复之间的差异很大。您对提高样品重现性有何建议？

  我们建议检查您的样品制备工作流程，以确保一致的蛋白质提取、还原/烷基化、消化和净化。建议进行高质量、可重复的样品制备流程。相关服务:蛋白分析

• • 什么是二维（2D）蛋白质凝胶电泳？

  2D 蛋白质凝胶电泳是蛋白质在二维空间上的分离。在第一维中，通过等电聚焦将蛋白质按等电点 (pI) 进行分离，在第二维中，通过 SDS-PAGE 将蛋白质按质量进行分离。相关服务:二维凝胶电泳服务

• • 进行蛋白质二维凝胶电泳的主要原因是什么？

  蛋白质二维凝胶电泳的主要应用和优势如下： 应用 比较蛋白质组学：识别和分析复杂蛋白质混合物之间的差异； 蛋白质分析，生物标志物发现； 蛋白质变体和亚型的分离和分析； 优点 同时分离数百到数千种蛋白质； 高容量和高分辨率； 兼容质谱用于蛋白质鉴定和测序的进一步分析； 能够分离和分析低丰度蛋白质

• • 什么是两性电解质？

  两性电解质是同时包含酸性和碱性基团的分子（因此是两性的），并且在一定的 pH 值范围内主要以两性离子的形式存在。平均电荷为零时的 pH 值称为分子的等电点（pI）。两性电解质用于建立稳定的 pH 梯度，用于等电聚焦。在含有两性电解质的凝胶中，施加电场时会建立线性 pH 梯度。两性电解质分子携

• • 在等电聚焦电泳（IEF）之前进行烷基化的目的是什么？

  烷基化通过烷基化半胱氨酸来防止不需要的蛋白质修饰，以避免混合二硫键的形成和再氧化，并允许更清晰的聚焦。相关服务:二维凝胶电泳服务

• • 蛋白质是如何在等电聚焦电泳（IEF）凝胶上被分离的？

  等电聚焦电泳 (IEF) 是一种基于等电点 (pI) 分离蛋白质的电泳技术。pI 是指蛋白质不带净电荷并且在电场中不移动的 pH 值。IEF 凝胶有效地产生了一个 pH 值梯度，因此蛋白质根据其独特的 pI 被分离。相关服务:二维凝胶电泳服务

• • 蛋白质组学实验应该如何设计？

  具体的研究目标通常对优化实验设计至关重要。例如，细胞内目标蛋白质的丰度可能决定了实验平台的选择或用于获取数据的仪器时间。每个实验条件包含的生物重复数也非常重要。对于定量分析，至少三个重复是必不可少的，在许多情况下建议五个重复或更多。相关服务:组学分析