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在生命科学研究和生物医药开发中,准确测定分子量是结构鉴定、质量控制、药物研发等多个环节的基础环节。无论是确认蛋白是否表达完整、还是验证合成小分子的纯度,分子量信息都是不可或缺的数据之一。在众多分子量测定技术中,液相色谱-质谱联用技术(LC-MS)因其高灵敏度、广泛适用性和结构解析能力,被广泛
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• 什么是 LC-MS 分子量分析?适用对象、方法及其优劣对比
分子量(molecular weight)是生物分子最基本、也是最重要的理化参数之一。在蛋白质工程、抗体药物开发、合成化合物验证、代谢组学分析等诸多生命科学领域,准确获取分子量信息不仅是结构解析的前提,更是质量控制和功能研究的基础。液相色谱-质谱联用技术(Liquid Chromatogra
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抗体作为基础研究与生物医药中的关键分子,其性能优劣直接影响实验结果的可靠性和下游应用的有效性。系统的抗体表征有助于明确其结构特征、功能活性及稳定性,是确保抗体质量一致性与功能可控性的关键步骤,尤其在药物开发、诊断试剂和精准治疗等领域尤为重要。 一、抗体表征为何重要? 抗体是一类功能性强、特
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• 亚细胞蛋白质组学工作流程全攻略(含质谱与SILAC技术)
在后基因组时代,亚细胞蛋白质组学(subcellular proteomics)正逐步成为揭示细胞功能、信号通路及疾病机制的关键研究方向。相比全细胞水平的蛋白质组学,亚细胞层面的研究聚焦于特定细胞器(如线粒体、内质网、细胞核等)内的蛋白表达、定位及动态变化,从而提供更高空间分辨率的数据支持。
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蛋白质之间的相互作用构成了细胞信号转导、代谢调控和疾病发生的分子基础。共免疫沉淀(Co-IP)作为研究内源性蛋白互作的经典方法,因其操作简便、特异性强、适应性广,至今仍在分子生物学和蛋白组学研究中发挥重要作用,尤其适合验证特定蛋白间的互作关系。 一、什么是共免疫沉淀(Co‑IP)? 共免疫
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• 基于质谱的全蛋白组分析(Shotgun Proteomics)
在系统生物学的时代,理解一个细胞、组织甚至整个生物体的生理状态,已不再仅依赖基因组或转录组数据。蛋白质组这一直接执行生物功能的分子群体,成为揭示生命奥秘的关键线索。而其中,基于质谱的全蛋白组分析(Shotgun Proteomics),已成为科研人员探索复杂生物体系中蛋白质表达、修饰和功能关
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在无标记定量蛋白质组学研究中,缺失值是数据分析过程中不可忽视的一环。它们广泛存在于原始质谱数据中,若处理不当,不仅会降低统计分析的准确性,还可能导致对生物学结论的误判。因此,科学系统地识别与处理缺失值,是保障数据质量与研究可信度的关键。 一、缺失值在无标记定量蛋白质组学数据中的成因与分类
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在定量蛋白质组学研究中,LFQ(Label-Free Quantification) 与 iBAQ(intensity-Based Absolute Quantification) 是两种常见但本质不同的定量策略。两者虽都基于 DDA(Data-Dependent Acquisition)质
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在Shotgun蛋白组学中,我们往往会面对成百上千个被鉴定的蛋白和肽段。然而,如何判断这些结果是否可信?哪些蛋白值得深入分析?哪些数据可以用于差异分析或功能注释?要回答这些问题,肽段覆盖率和蛋白得分是两个必须优先评估的关键参数。 一、肽段覆盖率分析:如何从覆盖程度判断Shotgun鉴定质量
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在细胞复杂的蛋白质网络中,低丰度蛋白扮演着关键调控角色,例如转录因子、信号通路调节因子和表观遗传调控因子。然而,由于其天然丰度低、表达时空特异、与互作伴侣结合弱或瞬时,免疫共沉淀(Co-IP)和拉下(pull-down)等方法往往难以捕获其真实的互作网络。邻近标记(Proximity Lab
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