蛋白分析FAQ汇总

• • WB膜可以质谱吗？

  是的，Western Blot（WB）膜上的蛋白质可以用于质谱分析。在Western Blot过程中，蛋白质被转移到PVDF或硝酸纤维素膜上，之后这些蛋白质可以从膜上切下，再进行酶解，最后进行质谱分析以确定蛋白质的身份或进行进一步的表征。 百泰派克生物科技--生物制

• • 交联法蛋白相互作用分析中，使用交联剂处理细胞后要用loadingbuffer然后煮吗？

  是的，在交联法蛋白相互作用分析中，提取蛋白后通常需要加入loading buffer，并进行煮沸处理。这个步骤是为了使蛋白质变性，以便于后续进行SDS-PAGE电泳分析。 百泰派克生物科技--生物制品表征，多组学生物质谱检测优质服务商 相关服务： 交联法蛋白相互作用分析 蛋白质相互作用分

• • 有了多肽序列，怎么检测这个多肽可不可用？

  检测多肽的可用性通常涉及对其生物学性质、稳定性、纯度和功能性的评估： 1.纯度检测： 高效液相色谱（HPLC）：用于检测多肽的纯度，即多肽样品中目标多肽的百分比。 质谱（MS）：用于确定多肽的分子质量，进一步确认其纯度和结构。 2.生物活性检测： 体外实验：如酶抑制测定、受体结合实

• • 交联法蛋白相互作用分析中，使用交联剂处理细胞后要用ripa裂解吗

  在交联法蛋白相互作用分析中，使用交联剂（如甲醛或双硫仑）处理细胞后，通常需要用RIPA缓冲液或其他蛋白裂解液进行裂解。这一步骤是为了破坏细胞膜和释放细胞内的蛋白质，使之能够在后续的分析中被检测。RIPA缓冲液能有效地裂解细胞和组织，释放蛋白质，并保持交联的蛋白质复合物稳定。 百泰派克生物科

• • 样品在-20℃存放3个月，对检测会有影响吗？

  对于大多数生物学和化学样品，-20℃的存储在三个月内一般不会对检测结果产生显著影响。当然，具体情况还是取决于样品类型和检测方法。生物样品（如DNA、RNA、蛋白质）通常可以在-20℃下长期存储而不影响后续的分子生物学检测，如PCR、西方印迹或酶联免疫吸附测定（ELISA）。然而，重复的冻融循

• • 提豆酱多肽里面还有食盐，需要脱盐吗？怎么脱呢？

  从豆酱提取的多肽中如果含有食盐，通常情况下是需要脱盐的。这是因为食盐（氯化钠）可能会影响多肽的纯度和稳定性，尤其是在用于某些特定的生物学或化学分析时。脱盐可以通过多种方法进行，主要的脱盐技术包括： 1.透析法： 这是一种常见的脱盐方法，通过使用半透膜来分离小分子的盐和大分子的多肽。透析袋中

• • 做蛋白组分液相分析，溶剂是0.1%TFA，流动相是0.1%TFA与乙腈，但是5min内总是会出现远远高于目标峰的峰是为什么呀？

  在蛋白质组学的液相色谱分析中，如果在5分钟内出现远高于目标峰的峰，这种情况有几个可能的原因： 1.系统峰或基线漂移： 在分析的初始阶段，由于流动相中的溶剂组分与色谱柱的平衡，可能会产生较大的系统峰。特别是在使用含有有机溶剂（如乙腈）和0.1%三氟乙酸（TFA）的流动相时，这种现象更为常见。

• • wb目的条带连成一条，内参正常，可能原因

  如果您的 WB（Western Blot）目的条带连成一条，但内参正常，可能的原因包括： 1.过度加载样本： 如果您加载的目标蛋白质样本过多，它们的条带可能会连成一条，因此请确保加载适量的样本。 2.抗体亲和力过强或浓度过高： 使用的一抗或二抗过于亲和或浓度设置得过高，导致过度染色。

• • 请问，WB电泳的时候，蛋白的上样量为什么是20ug-30ug，蛋白量过多过少会怎么样？蛋白上样量是与WB的测定目的有关吗？

  Western Blot（WB）实验中，蛋白的上样量通常建议在20μg-30μg之间，因为这个量级通常能保证足够的蛋白量以获得清晰的条带，同时又不至于过多导致信号饱和或条带模糊。如果蛋白量过多，可能导致信号过强、条带模糊，甚至可能出现条带堆积的现象；如果蛋白量过少

• • western blot 分离胶对应的浓度与蛋白大小（KD）的关系是怎么样的呢

  Western blot中，分离胶的浓度与蛋白质大小（kDa）的关系基本上是：分离胶的浓度越高，其分离的蛋白质分子量范围越小。具体来说： 1.低浓度的胶（比如5%）更适合分离大分子量的蛋白质（比如大于200 kDa）。 2.中等浓度的胶（比如10%-12%）通常用于分离中等分子量范围的蛋