蛋白分析FAQ汇总

• • 蛋白上样缓冲液HU buffer室温放置几小时会有影响吗

  蛋白上样缓冲液（HU buffer）放置在室温下几小时通常不会对其性能产生重大影响。这种缓冲液通常包含有助于维持蛋白质稳定性的成分，如还原剂和防止蛋白降解的物质。然而，长时间的室温暴露可能会降低其效率，尤其是如果缓冲液中包含敏感的还原剂，如DTT或β-巯基乙醇。为了保证最佳效果，最

• • WB条带周围一圈浅，中间黑是什么原因

  WB（Western Blot）条带周围浅色而中间较黑的现象通常是由于蛋白质过载或者检测过敏所致。当样品中蛋白质含量过高，超出了膜的结合能力或者检测系统的线性范围时，就可能出现中间较黑而边缘较浅的条带。这种情况下，中心部分的蛋白质过多，导致抗体饱和，而边缘处蛋白质相对较少，抗体结合不饱和，因

• • 小肠蛋白应该怎么提取？想检测小肠zo1表达水平，应该取小肠哪一部分合适？

  一、蛋白质提取 1、样品制备 将选定的小肠部分从实验动物中切除，并立即放入冷的生理盐水中以清洗掉残留的内容物。 2.组织均质化 使用均质器将小肠组织均质化。在此步骤中，组织被物理破碎，使得细胞内部的蛋白质可以释放到缓冲液中。 使用适合的缓冲液，例如含有抗蛋白酶抑制剂的磷酸盐缓冲液（PB

• • 两个蛋白有互作，加到缓冲液里共同孵育，缓冲液：蛋白1：蛋白2的体积配比应该是多少

  两个蛋白质进行相互作用实验时，缓冲液与蛋白质的体积比通常取决于需考虑多个因素，包括蛋白质的浓度、活性、相互作用的类型和强度，以及实验的特定目的。没有统一的“一刀切”配比。 一、配比的选择： 一个常见的起点是使用等摩尔的蛋白质，即蛋白1和蛋白2的摩尔浓度相同。例如，如

• • SDS-PAGE电泳marker背景相比于样品背景更加透明，脱色脱的更干净是什么原因

  SDS-PAGE电泳中marker（标记物）背景比样品背景更透明、脱色更干净主要是由于： 1.蛋白浓度差异： Marker通常是纯化的蛋白，浓度较低，而样品中的蛋白可能浓度较高。高浓度蛋白在电泳后更难脱色。 2.样品的其他成分： 样品中除了蛋白质外，还可能含有影响染色和脱色的其他成分，如

• • 蛋白质组学里面检索数据库要怎么选择？

  蛋白质组学研究中选择合适的蛋白质数据库是关键一步，因为它直接影响到质谱数据的解析和鉴定的准确性。一些常用的蛋白质数据库及其适用情形如下： 1.UniProt (Universal Protein Resource)： 这是最全面的蛋白质数据库之一，包含了大量物种的蛋白质序列信息。适用于多种

• • 拿到蛋白质组数据后，应该怎么分析，里面什么都有，我要做的是什么？

  拿到蛋白质组学数据后，您可以进行一系列分析来提取有意义的生物学信息。蛋白质组学数据分析的步骤和具体目标可能会根据您的研究目的和数据类型（如质谱数据、蛋白芯片数据等）而有所不同。 1.质量控制： 检查数据质量，确保没有技术误差。 2.蛋白鉴定： 使用质谱软件与蛋白质数据库匹配，鉴定样本中的

• • 转膜marker颜色很浅 且感觉条带飞了 是为什么

  WB转膜出现以上情况可能是由下面几个因素造成的： 1.膜转移效率不足： 如果膜转移效率不高，可能会导致marker颜色浅。这可能是由于电转膜的电压或时间设置不当，或者使用的膜与蛋白质的亲和力不足。 2.样品过载或电泳条件不当： 如果样品加载过多或电泳条件不适宜（如电压过高或运行时间过长）

• • WB蛋白块，每个颜色都是两边深中间浅请问是啥原因？

  在Western Blot (WB) 分析中，如果出现蛋白带两边深中间浅的现象，最可能的原因是样品过载。当在凝胶槽中加载的蛋白质量超过了其分离能力时，蛋白质在电泳过程中可能无法均匀迁移，尤其是在凝胶的中心部位。这会导致蛋白在边缘处迁移得更快或更远，造成带的中间部分相对较浅。

• • 请问WB实验封闭时转速被误调为130r，对结果会有影响吗?

  在Western Blot实验中，如果封闭（阻塞）步骤的转速被误设为130 rpm，一般情况下对实验结果的影响不大。封闭步骤的主要目的是阻止非特异性抗体结合，而这一过程主要取决于阻塞剂的类型和浓度，以及封闭时间的长度。 转速的调整主要是为了确保阻塞剂在膜上均匀分布，避免出现干斑或未覆盖区域