蛋白分析FAQ汇总
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在Western Blot (WB) 分析中，如果出现蛋白带两边深中间浅的现象，最可能的原因是样品过载。当在凝胶槽中加载的蛋白质量超过了其分离能力时，蛋白质在电泳过程中可能无法均匀迁移，尤其是在凝胶的中心部位。这会导致蛋白在边缘处迁移得更快或更远，造成带的中间部分相对较浅。
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• 请问WB实验封闭时转速被误调为130r，对结果会有影响吗?
在Western Blot实验中，如果封闭（阻塞）步骤的转速被误设为130 rpm，一般情况下对实验结果的影响不大。封闭步骤的主要目的是阻止非特异性抗体结合，而这一过程主要取决于阻塞剂的类型和浓度，以及封闭时间的长度。 转速的调整主要是为了确保阻塞剂在膜上均匀分布，避免出现干斑或未覆盖区域
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Western Blot（WB）实验中趋势不一致通常指的是重复实验之间结果差异较大。应对这一问题时，主要策略是仔细检查实验的各个步骤，以确保一致性和准确性。具体措施包括： 1、样品制备： 确保样品的蛋白质浓度一致。使用蛋白酶抑制剂以防止蛋白质降解。确保样品在实验过程中的处理方式一致。 2
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1.转移效率低下： 电压是推动膜材料从一个表面转移到另一个表面的驱动力。如果电压太低，可能不足以有效地完成这个过程，导致转移效率降低。 2.不均匀的转移： 由于电压不足，膜材料可能无法均匀地转移，这可能导致转移后的膜出现厚薄不一、缺陷或瑕疵等问题。 3.膜质量差： 膜的完整性和均匀性对于
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• 样品寄送过程,哪些需要低温?哪些需要干冰?哪些常温就可以?
样品寄送的温度要求主要取决于样品的性质。下面是一些常见的样品类型及其相应的温度要求： 1.生物样品（如血液、细胞、组织）： 这些样品通常需要在低温下运输，以防止细胞活性的丧失或分解。它们通常需要干冰或者液氮来保持低温。 2.化学试剂： 某些化学试剂在常温下可能会分解或反应，因此需要低温保
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Western Blot（WB）实验中的上样体系（Loading Buffer 或 Sample Buffer）通常包含几个关键成分： Tris-HCl 缓冲液：通常浓度为 0.5 M，pH 值约 6.8。 SDS（十二烷基硫酸钠）：通常浓度为 10%。 甘油：通常浓度为 20-
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在Western Blot (WB) 实验中安排样本顺序时，主要考虑以下几点： 1、对照样本： 将正对照（表达目标蛋白的样本）和负对照（不表达目标蛋白的样本）放在实验的开始和结束位置，以便于结果的比较和确认。 2、重复样本： 如果实验中包括重复样本，应将重复样本并排放置，以便于结果的比较和
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Western Blot（WB）实验中出现的条带空白且发光（通常指在成像时出现过曝光的现象）可能由以下原因造成： 1、样品蛋白浓度过高： 如果加载的样品蛋白浓度过高，可能导致信号过强，造成条带处发光。解决方法是稀释样品，减少加载量。 2、一抗或二抗浓度过高： 抗体浓度过高会导致非
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• 请问跑泛素化应该配多大浓度的胶，转膜的电流大小及时间是多少，以及PVDF膜用0.45还是0.22？
1、凝胶的浓度： 对于大多数蛋白质，使用 8-12% 的SDS-PAGE凝胶是比较常见的。如果目标蛋白较小（<20 kDa）或者非常大（>200 kDa），可能需要使用更高或更低浓度的凝胶。 2、电泳的电流和时间： 通常情况下，电泳的电流设置为常电流（constant curr
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• 蛋白在酶切之前就分成了相隔很近的两条带，在酶切后两条带分别减少，过akta后还是会出现相隔很近的两条带是什么原因，怎么解决？
蛋白在酶切之前就分成两条相隔很近的带，并且在酶切和经过AKTA纯化后仍然出现这种现象可能有几个原因： 1.蛋白异构体： 可能存在蛋白的不同异构体或者蛋白质的不同翻译后修饰形式，如磷酸化、糖基化等。 2.蛋白部分降解： 蛋白可能在提取或处理过程中发生了部分降解，导致出现大小略有差异的多个片
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