蛋白分析FAQ汇总

• • 转膜过程前，为什么需要用转膜缓冲液浸泡膜啊？

  在转膜过程中使用转膜缓冲液浸泡膜是出于几个关键原因： 1.膜的活化： 某些膜材料，如硝酸纤维素或聚偏氟乙烯（PVDF），需要通过缓冲液活化以提高其亲和力，确保蛋白质有效地从凝胶转移到膜上。 2.防止干燥： 保持膜的湿润状态防止在转膜过程中干燥，干燥的膜可能导致蛋白质转移不均匀或效率降低。

• • WB出现过曝光的条带是为什么？有什么解决办法吗？

  Western blot出现过曝光的条带通常是由于曝光时间过长或者抗体浓度太高所导致。解决这个问题的办法包括： 1.调整曝光时间： 减少曝光时间，尤其是在使用化学发光检测系统时。 2.优化抗体浓度： 降低一抗或二抗的浓度。 3.洗涤步骤： 增加膜的洗涤次数或时间，以减少非特异性结合。

• • WB电泳样品孔中加样量一般是多少，这是根据什么来设定的，过多或过少又会导致什么后果诶

  免疫印迹(Western Blot, WB)电泳中样品孔加样量的确定取决于几个因素，主要包括凝胶的尺寸、孔的容积、样品的浓度和所需检测的蛋白质的丰度。通常，加样量范围在10到30微升之间。 如果加样量过多，可能会导致以下后果： 1.样品溢出： 样品可能会从一个孔溢出到相邻的孔，导致结果混

• • 目前已经用His标签纯化了目的蛋白A。做Co:Ip时，可不可以用myc标签纯化另一个蛋白，然后做co,ip实验？

  可以的。使用His标签纯化目的蛋白A之后，您完全可以使用Myc标签来纯化另一个蛋白，然后进行共免疫沉淀（Co-IP）实验。这种方法允许您特异性地识别和纯化两种不同的蛋白，从而使得Co-IP实验更加精确和可靠。在实验中，您可以用抗Myc抗体捕获Myc标签蛋白，然后检测是否有His标签的蛋白A与

• • 蛋白组学检测到的差异蛋白为什么western blot检测不到？

  蛋白组学通过质谱等技术检测到的差异蛋白在Western Blot中检测不到可能有几个原因： 1.检测灵敏度不同： 质谱等蛋白组学方法通常比Western Blot更敏感，能检测到低丰度的蛋白。 2.靶蛋白特异性： Western Blot依赖特异性抗体识别目标蛋白，如果抗体对该蛋白的识别

• • WB的泳道背景比较黑，接近灰色是为什么啊？

  Western blot泳道背景变黑或接近灰色通常是由于以下几个原因造成的： 1.过度曝光： 如果曝光时间太长，胶片或成像系统可能会捕捉到过多的信号，导致背景变暗。 2.膜处理不当： 在转移或阻断步骤中，如果膜处理不当，比如阻断不充分，可能会导致非特异性结合，使背景变暗。 3.抗体浓度

• • 小分子蛋白（10KD）WB实验电泳液中不加SDS，但是wb不就是依靠SDS聚丙烯凝胶电泳的吗？如果不加SDS，是用tris填平吗

  小分子蛋白（10KD）在进行Western Blot（WB）实验时，通常确实使用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）。SDS是一种表面活性剂，它的作用是使蛋白质变性并赋予蛋白质负电荷，使蛋白质按照大小进行分离。 如果你在电泳过程中不加SDS，蛋白质将不会完全变性，这意味着蛋白质的电

• • 兔多抗用溴化氢琼脂糖凝胶纯化没有成功是什么原因？一般怎么验证抗原偶联上了？

  使用溴化氢琼脂糖凝胶纯化兔多抗失败可能有多方面的原因，比如： 1.凝胶本身的问题： 凝胶的特性可能不适合所用的抗原或抗体，不同的凝胶有不同的孔隙大小和亲和力特性，确保使用的琼脂糖凝胶适合于你的实验。 2.偶联效率低合： 如果抗原和载体（如琼脂糖珠）的偶联效率不高，可能导致目标抗体的亲和力

• • hplc怎么将游离氨基酸和结合氨基酸分开测定

  高效液相色谱（HPLC）分离游离氨基酸和结合氨基酸主要是基于它们在分子大小、溶解性和亲疏水性等方面的差异。游离氨基酸是单个的小分子，而结合氨基酸通常存在于蛋白质或多肽中，这些大分子在大小和形态上与游离氨基酸有显著差异。这使得它们在色谱柱中的行为不同。大分子在色谱柱中的洗脱时间比小分子短，因此

• • wb蛋白鉴别实验凝胶脱色后 marker泳道相比于样品泳道背景更透明

  在Western Blot (WB) 蛋白鉴别实验中，凝胶脱色后发现marker泳道相比于样品泳道背景更透明，是实验过程中常见的现象，通常是由几个因素造成的： 1.蛋白质浓度差异： 样品中的蛋白质浓度可能远高于marker。在染色和脱色过程中，高浓度的蛋白质可能导致更强的染色，相应地，在脱