蛋白分析FAQ汇总

• • 过表达的带FLag标签的蛋白，可以用目标抗体检测到很强的带，但没法用标签抗体wb检测到标签。原因是什么？

  在表达带有FLAG标签的蛋白时，如果可以用目标抗体检测到强烈的条带，但无法用标签抗体通过免疫印迹（Western Blot, WB）检测到标签，可能有几个原因： 1.标签抗体的特异性或活性问题： 可能是Flag标签抗体的特异性或活性不足。可能是抗体本身的问题，或者抗体已经过期或在储存过程中

• • HIF-1α蛋白纯化

  HIF-1α（缺氧诱导因子1α）是一种在缺氧条件下表达的转录因子，它在细胞适应缺氧环境中发挥重要作用。蛋白质纯化是一个复杂的过程，涉及多个步骤，确保获得高纯度和活性的蛋白。以下是一个基本的HIF-1α蛋白纯化步骤概述： 1.细胞裂解： 如果HIF-1&a

• • 在高效液相实验中测样品时，用50%的甲醇溶解样品跟用100%的甲醇溶解样品时再上液相测量的话，测量结果有啥不一样？

  在高效液相色谱（HPLC）实验中，使用不同浓度的溶剂（如50%的甲醇和100%的甲醇）溶解样品，可能会对测量结果产生以下影响： 1、溶解性： 不同浓度的甲醇可能会影响样品的溶解度。如果样品在50%的甲醇中溶解性不好，可能会导致样品部分沉淀，这样在高效液相色谱中就无法完全检测到所有的组分。

• • sds凝胶电泳上样时样品向上浮是什么原因啊？buffer和电泳液的浓度是配套的吗？

  SDS-PAGE（SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳）中样品向上浮的现象通常是由于以下原因造成的： 1、样品准备问题： 如果样品中含有大量的油脂或是有机溶剂，这些物质的密度可能低于水，导致样品在凝胶中上浮。确保样品在加入上样缓冲液后充分混合和加热，以保证蛋白质充分变性并与S

• • page胶跑完蛋白染考马斯亮蓝，偶尔出现空染是什么情况呢？

  PAGE凝胶（聚丙烯酰胺凝胶电泳）在使用考马斯亮蓝染色后出现空染（也就是部分区域未染色或染色较浅）的情况可能由多种因素引起： 1、蛋白质浓度过低： 如果某些泳道中的蛋白质浓度太低，可能导致这些区域染色不明显或看不到条带。 2、染色或脱色不均匀： 如果在染色或脱色过程中，凝胶未能完全浸没在

• • 磷酸化蛋白质组在过柱富集分析等步骤后，怎么确定蛋白的磷酸化位点的？

  质谱技术是确定蛋白磷酸化位点的重要工具，在磷酸化蛋白质过柱富集分析后，接下来的实验流程如下： 1、蛋白质消化 将富集的磷酸化蛋白质用特定的蛋白酶（如胰蛋白酶）消化成较小的肽段。 2、磷酸化肽段富集 使用特定的亲和层析技术（如IMAC或TiO2）来富集磷酸化的肽段。这些富集方法能够特异性地

• • 为什么用Alix蛋白抗体，实验WB上样细胞裂解液会显示两个条带？哪个为准？

  使用Alix蛋白抗体在Western Blot（WB）实验中出现两个条带可能有以下原因： 1、蛋白质同源异构体： Alix蛋白可能存在不同的同源异构体，这些异构体在分子量上略有不同，从而在凝胶上表现为不同的条带。 2、蛋白质降解产物： 如果Alix蛋白在细胞裂解过程中部分降解，这可能导致

• • wb实验时蛋白加热变性后有沉淀

  在Western Blot (WB) 实验中，蛋白质加热变性后出现沉淀是一个常见问题。通常由以下几个因素引起： 1.蛋白质浓度过高： 如果样品中的蛋白质浓度过高，加热时可能会导致蛋白质过度聚集和沉淀。 2.样品缓冲液不适当： 使用的样品缓冲液可能不适合所分析的蛋白质。例如，缓冲液的pH值

• • Wnt3a 蛋白建议的转膜及电泳条件？

  Wnt3a是一种疏水性强的蛋白质，其正确的转膜和电泳条件对于成功的Western Blot实验至关重要。 1、电泳条件： Wnt3a蛋白的分子量约为39 kDa，因此建议使用10%或12%的聚丙烯酰胺凝胶。 建议在恒压模式下进行电泳，开始电压可设置为80-100伏特，直至样品进入分离凝胶

• • 用一定浓度的乙醇回流提取样品时，过滤浓缩好是进行冻干再上液相测量好，还是旋转浓缩好直接上液相测量好？

  在使用一定浓度的乙醇进行样品提取后，接下来如何处理样品以进行液相色谱（HPLC）测量，通常取决于样品的性质和实验的具体要求。这里有两种常见的方法：冻干和旋转蒸发（旋转浓缩），每种都有其优势和局限性。 一、冻干： 1.优势： 冻干可以非常有效地去除所有溶剂，特别适用于热敏感物质。这种方法不