蛋白分析FAQ汇总
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O-糖富集(O-glycan enrichment)是一种用于提取和分析蛋白质上O-连接糖基的技术。由于O-糖基化在生物学中的重要性,例如在蛋白质稳定性、折叠和细胞间交流中,这种技术在生物学和生物化学研究中变得非常关键。以下是几种常见的富集O-糖肽的方法: 1.特异性酶切: 一些酶如O-糖
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阴性对照通常使用不特异的IgG,例如兔或小鼠的IgG.当进行免疫共沉淀实验时,阴性对照IgG太浓可能会导致结果的偏差。以下是处理阴性对照IgG太浓的几个建议: 1.确认实验条件: 首先,确认实验条件是否正确设置。检查使用的抗体浓度、共沉淀缓冲液的配制是否正确。确保实验条件的准确性是解决问题
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免疫共沉淀(Co-IP)是一个用于检测两种或多种蛋白质之间在细胞内是否存在物理互作的技术。其原理是基于抗体的特异性结合能力,利用抗体与目标蛋白质结合形成免疫复合物,然后通过沉淀技术将免疫复合物与其它相互作用的蛋白质一起沉淀下来,从而实现对目标蛋白质与其相互作用蛋白质的检测: 特异性抗体与目
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• 为什么做western同一批次提取蛋白跑出的条带不一致?
当进行 Western blot 实验时,同一批次提取的蛋白质跑出的条带不一致可能是由于以下几个因素导致的: 1.电泳条件不一致: 电压或电流的不稳定可能影响蛋白的迁移。 2.凝胶问题: 使用的SDS-PAGE凝胶可能存在问题,如凝胶制备不均匀或者存储时间过长。 3.转膜过程问题: 转
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以下是一些常用的蛋白磷酸化检测方法: 1.免疫印迹(Western blotting): 这是一种常用的蛋白质检测方法,可以用于检测蛋白磷酸化状态。首先,将蛋白样品经过电泳分离,然后将蛋白转移到膜上。接下来,使用特异性的抗体来探测磷酸化蛋白。最后,通过化学发光或染色方法来观察蛋白的表达水平
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• 用Co-IP验证出两个蛋白互作,但是其他验证方式却不互作,是不是Co-IP不可靠?
Co-IP是一种常用的蛋白质相互作用验证方法,但并不是唯一可靠的方法。为了确保结果的可靠性,应该综合考虑Co-IP与其他验证方式的结果,并进行进一步的实验和分析。 Co-IP也存在一些局限性。首先,Co-IP只能检测已知的相互作用蛋白,对于未知的相互作用可能无法发现。其次,Co-IP的结果
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当涉及到蛋白质互作的研究时,有多种实验方法可供选择。以下是一些常用的蛋白质互作实验方法: 1.免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP): 利用特异性抗体捕获目标蛋白质,并检测与之相互作用的其他蛋白质。 2.酵母双杂交(Yeast Two-Hybrid,Y2H
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研究蛋白质相互作用网络主要包括以下几个步骤: 1. 数据收集: 实验方法:使用蛋白质互作实验方法(如Y2H、Co-IP、AP-MS等)进行大规模筛查。 公共数据库:利用已有的蛋白质-蛋白质互作数据库(如BioGRID、STRING等)收集数据。 2. 数据整合和清洗: 整合来自不同
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选择蛋白质相互作用的实验方法时,应考虑以下几个因素: 1. 实验的目的: 筛选未知互作蛋白:如果是筛选未知的互作蛋白,可以使用酵母双杂交(Y2H)或质谱方法。 验证特定互作:如果是验证特定的蛋白质互作,可以使用免疫共沉淀(Co-IP)或生物层析(BLI)。 2. 样品类型: 体内实
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研究蛋白质相互作用时,酵母双杂交、免疫共沉淀、表面等离子共振和质谱分析等方法可能都会产生假阴性结果。以下是一些常见的方法和可能导致假阴性结果的原因: 1、酵母双杂交(Y2H): 酵母双杂交是一种常用的蛋白质相互作用研究方法。然而,由于技术限制,酵母双杂交可能会产生假阴性结果。可能的原因包括
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