蛋白分析FAQ汇总

• • 兔多抗用溴化氢琼脂糖凝胶纯化没有成功是什么原因？一般怎么验证抗原偶联上了？

  使用溴化氢琼脂糖凝胶纯化兔多抗失败可能有多方面的原因，比如： 1.凝胶本身的问题： 凝胶的特性可能不适合所用的抗原或抗体，不同的凝胶有不同的孔隙大小和亲和力特性，确保使用的琼脂糖凝胶适合于你的实验。 2.偶联效率低合： 如果抗原和载体（如琼脂糖珠）的偶联效率不高，可能导致目标抗体的亲和力

• • hplc怎么将游离氨基酸和结合氨基酸分开测定

  高效液相色谱（HPLC）分离游离氨基酸和结合氨基酸主要是基于它们在分子大小、溶解性和亲疏水性等方面的差异。游离氨基酸是单个的小分子，而结合氨基酸通常存在于蛋白质或多肽中，这些大分子在大小和形态上与游离氨基酸有显著差异。这使得它们在色谱柱中的行为不同。大分子在色谱柱中的洗脱时间比小分子短，因此

• • wb蛋白鉴别实验凝胶脱色后 marker泳道相比于样品泳道背景更透明

  在Western Blot (WB) 蛋白鉴别实验中，凝胶脱色后发现marker泳道相比于样品泳道背景更透明，是实验过程中常见的现象，通常是由几个因素造成的： 1.蛋白质浓度差异： 样品中的蛋白质浓度可能远高于marker。在染色和脱色过程中，高浓度的蛋白质可能导致更强的染色，相应地，在脱

• • 蛋白纯化时，老是挂不上柱子是为什么呢？

  在蛋白纯化过程中，如果蛋白质不能有效地吸附到柱子上，可能有几个原因： 1.缓冲液pH不适宜： 蛋白质的结合通常取决于其等电点和缓冲液的pH。如果pH不适宜，蛋白质可能无法正确结合。 2.盐浓度过高或过低： 盐浓度会影响蛋白质的溶解度和结合能力。如果盐浓度不适宜，可能会阻碍蛋白质的吸附。

• • WB肠组织蛋白提取上清黄色正常吗？

  在Western Blot（WB）实验中，肠组织蛋白提取的上清呈现黄色是正常的情况。这种黄色通常来源于组织中的胆汁色素，这些色素可以使蛋白提取液呈现黄色。然而，需要注意的是，样品的颜色并不直接影响Western Blot实验的结果，更重要的是确保蛋白提取和浓度测定的正确性。如果有其他异常现象

• • 蛋白上样缓冲液HU buffer室温放置几小时会有影响吗

  蛋白上样缓冲液（HU buffer）放置在室温下几小时通常不会对其性能产生重大影响。这种缓冲液通常包含有助于维持蛋白质稳定性的成分，如还原剂和防止蛋白降解的物质。然而，长时间的室温暴露可能会降低其效率，尤其是如果缓冲液中包含敏感的还原剂，如DTT或β-巯基乙醇。为了保证最佳效果，最

• • WB条带周围一圈浅，中间黑是什么原因

  WB（Western Blot）条带周围浅色而中间较黑的现象通常是由于蛋白质过载或者检测过敏所致。当样品中蛋白质含量过高，超出了膜的结合能力或者检测系统的线性范围时，就可能出现中间较黑而边缘较浅的条带。这种情况下，中心部分的蛋白质过多，导致抗体饱和，而边缘处蛋白质相对较少，抗体结合不饱和，因

• • 小肠蛋白应该怎么提取？想检测小肠zo1表达水平，应该取小肠哪一部分合适？

  一、蛋白质提取 1、样品制备 将选定的小肠部分从实验动物中切除，并立即放入冷的生理盐水中以清洗掉残留的内容物。 2.组织均质化 使用均质器将小肠组织均质化。在此步骤中，组织被物理破碎，使得细胞内部的蛋白质可以释放到缓冲液中。 使用适合的缓冲液，例如含有抗蛋白酶抑制剂的磷酸盐缓冲液（PB

• • 两个蛋白有互作，加到缓冲液里共同孵育，缓冲液：蛋白1：蛋白2的体积配比应该是多少

  两个蛋白质进行相互作用实验时，缓冲液与蛋白质的体积比通常取决于需考虑多个因素，包括蛋白质的浓度、活性、相互作用的类型和强度，以及实验的特定目的。没有统一的“一刀切”配比。 一、配比的选择： 一个常见的起点是使用等摩尔的蛋白质，即蛋白1和蛋白2的摩尔浓度相同。例如，如

• • SDS-PAGE电泳marker背景相比于样品背景更加透明，脱色脱的更干净是什么原因

  SDS-PAGE电泳中marker（标记物）背景比样品背景更透明、脱色更干净主要是由于： 1.蛋白浓度差异： Marker通常是纯化的蛋白，浓度较低，而样品中的蛋白可能浓度较高。高浓度蛋白在电泳后更难脱色。 2.样品的其他成分： 样品中除了蛋白质外，还可能含有影响染色和脱色的其他成分，如