蛋白分析FAQ汇总
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• 蛋白质的糖基化在哪里进行? 粗面型内质网还是光面型内质网?
蛋白质的糖基化主要在粗面内质网（Rough Endoplasmic Reticulum, RER）进行。粗面内质网的表面附着着大量核糖体，这是蛋白质合成的地点。当蛋白质在核糖体上合成时，它们进入粗面内质网的腔内，并在那里进行糖基化，这是一种修饰过程，涉及将糖链附加到蛋白质上。 相比之下，光
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乳酰化（Lactylation）是一种最近才被发现的蛋白质翻译后修饰，其中乳酸通过一个共价键附加到蛋白质的赖氨酸残基上。这种修饰在细胞代谢、特别是在乳酸代谢和免疫反应中扮演重要角色。乳酰化位点指的是蛋白质上发生乳酰化的特定赖氨酸残基。 质谱分析是鉴定蛋白质乳酰化位点的黄金标准。通过分离和鉴
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氨基酸的质谱检测通常使用正离子模式。这是因为氨基酸在溶液中容易形成阳离子，特别是在酸性条件下。在质谱分析中，正离子模式能更有效地检测和分析这些阳离子形式的氨基酸。 然而，有些特定情况下可能会使用负离子模式，尤其是当氨基酸或其衍生物在分析条件下更倾向于形成阴离子时。这种情况较为少见，取决于具
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O-糖基化Western Blot（WB）抗体检测的基本步骤如下： 1.样本准备： 收集并制备含有目标蛋白的细胞或组织样本。使用适当的裂解缓冲液裂解样本，然后通过离心去除不可溶物。 2.蛋白浓度测定： 使用BCA蛋白测定试剂盒或类似方法，测定样本中的蛋白浓度。 3.SDS-PAGE电泳
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• 在制备免疫复合物时，蛋白总量推荐用多少呢？加入的抗体量，蛋白+抗体去孵育，还是需要加点温和裂解液去孵育呢？
在制备免疫复合物时，蛋白总量通常建议在几百微克到几毫克之间，具体取决于目标蛋白的丰度和抗体的亲和力。加入的抗体量一般为1-10微克，具体根据抗体的效率和特异性来调整。将蛋白和抗体混合后，通常需要在温和裂解液中孵育，以保持蛋白质的天然构象和相互作用。孵育时间和条件（如温度）也需要根据具体的实验
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• 做SUMO内源性的Coip，样品组织放太久了对实验有影响吗？提取蛋白时加了NEM了
如果样品组织存放时间过长，尤其是在非最佳条件下（如未适当冷冻或未添加蛋白酶抑制剂），蛋白质可能会发生降解或发生不可逆的改变，导致实验的蛋白质量量和修饰状态不准确。即使在加入了NEM的情况下，这些改变仍可能发生，因为NEM主要是用来抑制蛋白酶的活性，而不是防止所有的蛋白质降解形式。因此，尽管加
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BS3交联的步骤通常包括以下几个关键环节： 1.样品准备: 首先准备好要交联的蛋白质样品。确保蛋白质浓度适宜，并且样品处于合适的缓冲液中。 2.BS3溶液配置： 将BS3溶解在适当的溶剂中（例如DMSO或水），以达到所需的浓度。 3.加入BS3至样品： 将BS3溶液加入到蛋白质样品中，
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蛋白质糖基化是指蛋白质上添加糖基的过程，这个过程会导致蛋白质分子量的增加，但具体增加多少取决于以下因素： 1.糖基的类型和数量： 不同类型的糖基（如葡萄糖、半乳糖、神经酰胺等）具有不同的分子量，且一个蛋白质上可以添加不止一个糖基。 2.糖链的长度和分支： 糖链可以是单一的糖基，也可以是长
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N-连接和O-连接糖基化是糖蛋白生物合成中的两种主要类型，它们在多种生物过程中起着重要作用。以下是它们之间的主要区别： 一、N-连接糖基化（N-linked glycosylation）： 1.这种类型的糖基化发生在天冬酰胺（Asparagine, Asn）上。 2.它涉及到一个特定的
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b离子和y离子是蛋白/肽段在串联质谱分析中观察到的两种常见的断裂离子类型，在碰撞诱导解离（CID）或其他碎片化方法下断裂时产生。 b离子是通过肽链的氨基末端（N-末端）形成的。当肽链中的骨架（即肽键）断裂时，如果带有电荷的部分包括了肽的N-末端，那么生成的离子就被称为b离子。b离子系列有助
How to order?
