蛋白分析FAQ汇总

• • WB实验怎么安排样本顺序？

  在Western Blot (WB) 实验中安排样本顺序时，主要考虑以下几点： 1、对照样本： 将正对照（表达目标蛋白的样本）和负对照（不表达目标蛋白的样本）放在实验的开始和结束位置，以便于结果的比较和确认。 2、重复样本： 如果实验中包括重复样本，应将重复样本并排放置，以便于结果的比较和

• • WB跑出来的条带一片空白，白的发光，是什么原因呢

   Western Blot（WB）实验中出现的条带空白且发光（通常指在成像时出现过曝光的现象）可能由以下原因造成： 1、样品蛋白浓度过高： 如果加载的样品蛋白浓度过高，可能导致信号过强，造成条带处发光。解决方法是稀释样品，减少加载量。 2、一抗或二抗浓度过高： 抗体浓度过高会导致非

• • 请问跑泛素化应该配多大浓度的胶，转膜的电流大小及时间是多少，以及PVDF膜用0.45还是0.22？

  1、凝胶的浓度： 对于大多数蛋白质，使用 8-12% 的SDS-PAGE凝胶是比较常见的。如果目标蛋白较小（<20 kDa）或者非常大（>200 kDa），可能需要使用更高或更低浓度的凝胶。 2、电泳的电流和时间： 通常情况下，电泳的电流设置为常电流（constant curr

• • 蛋白在酶切之前就分成了相隔很近的两条带，在酶切后两条带分别减少，过akta后还是会出现相隔很近的两条带是什么原因，怎么解决？

  蛋白在酶切之前就分成两条相隔很近的带，并且在酶切和经过AKTA纯化后仍然出现这种现象可能有几个原因： 1.蛋白异构体： 可能存在蛋白的不同异构体或者蛋白质的不同翻译后修饰形式，如磷酸化、糖基化等。 2.蛋白部分降解： 蛋白可能在提取或处理过程中发生了部分降解，导致出现大小略有差异的多个片

• • 过表达的带FLag标签的蛋白，可以用目标抗体检测到很强的带，但没法用标签抗体wb检测到标签。原因是什么？

  在表达带有FLAG标签的蛋白时，如果可以用目标抗体检测到强烈的条带，但无法用标签抗体通过免疫印迹（Western Blot, WB）检测到标签，可能有几个原因： 1.标签抗体的特异性或活性问题： 可能是Flag标签抗体的特异性或活性不足。可能是抗体本身的问题，或者抗体已经过期或在储存过程中

• • HIF-1α蛋白纯化

  HIF-1α（缺氧诱导因子1α）是一种在缺氧条件下表达的转录因子，它在细胞适应缺氧环境中发挥重要作用。蛋白质纯化是一个复杂的过程，涉及多个步骤，确保获得高纯度和活性的蛋白。以下是一个基本的HIF-1α蛋白纯化步骤概述： 1.细胞裂解： 如果HIF-1&a

• • 在高效液相实验中测样品时，用50%的甲醇溶解样品跟用100%的甲醇溶解样品时再上液相测量的话，测量结果有啥不一样？

  在高效液相色谱（HPLC）实验中，使用不同浓度的溶剂（如50%的甲醇和100%的甲醇）溶解样品，可能会对测量结果产生以下影响： 1、溶解性： 不同浓度的甲醇可能会影响样品的溶解度。如果样品在50%的甲醇中溶解性不好，可能会导致样品部分沉淀，这样在高效液相色谱中就无法完全检测到所有的组分。

• • sds凝胶电泳上样时样品向上浮是什么原因啊？buffer和电泳液的浓度是配套的吗？

  SDS-PAGE（SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳）中样品向上浮的现象通常是由于以下原因造成的： 1、样品准备问题： 如果样品中含有大量的油脂或是有机溶剂，这些物质的密度可能低于水，导致样品在凝胶中上浮。确保样品在加入上样缓冲液后充分混合和加热，以保证蛋白质充分变性并与S

• • page胶跑完蛋白染考马斯亮蓝，偶尔出现空染是什么情况呢？

  PAGE凝胶（聚丙烯酰胺凝胶电泳）在使用考马斯亮蓝染色后出现空染（也就是部分区域未染色或染色较浅）的情况可能由多种因素引起： 1、蛋白质浓度过低： 如果某些泳道中的蛋白质浓度太低，可能导致这些区域染色不明显或看不到条带。 2、染色或脱色不均匀： 如果在染色或脱色过程中，凝胶未能完全浸没在

• • 磷酸化蛋白质组在过柱富集分析等步骤后，怎么确定蛋白的磷酸化位点的？

  质谱技术是确定蛋白磷酸化位点的重要工具，在磷酸化蛋白质过柱富集分析后，接下来的实验流程如下： 1、蛋白质消化 将富集的磷酸化蛋白质用特定的蛋白酶（如胰蛋白酶）消化成较小的肽段。 2、磷酸化肽段富集 使用特定的亲和层析技术（如IMAC或TiO2）来富集磷酸化的肽段。这些富集方法能够特异性地