蛋白分析FAQ汇总

• • sds凝胶电泳上样时样品向上浮是什么原因啊？buffer和电泳液的浓度是配套的吗？

  SDS-PAGE（SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳）中样品向上浮的现象通常是由于以下原因造成的： 1、样品准备问题： 如果样品中含有大量的油脂或是有机溶剂，这些物质的密度可能低于水，导致样品在凝胶中上浮。确保样品在加入上样缓冲液后充分混合和加热，以保证蛋白质充分变性并与S

• • page胶跑完蛋白染考马斯亮蓝，偶尔出现空染是什么情况呢？

  PAGE凝胶（聚丙烯酰胺凝胶电泳）在使用考马斯亮蓝染色后出现空染（也就是部分区域未染色或染色较浅）的情况可能由多种因素引起： 1、蛋白质浓度过低： 如果某些泳道中的蛋白质浓度太低，可能导致这些区域染色不明显或看不到条带。 2、染色或脱色不均匀： 如果在染色或脱色过程中，凝胶未能完全浸没在

• • 磷酸化蛋白质组在过柱富集分析等步骤后，怎么确定蛋白的磷酸化位点的？

  质谱技术是确定蛋白磷酸化位点的重要工具，在磷酸化蛋白质过柱富集分析后，接下来的实验流程如下： 1、蛋白质消化 将富集的磷酸化蛋白质用特定的蛋白酶（如胰蛋白酶）消化成较小的肽段。 2、磷酸化肽段富集 使用特定的亲和层析技术（如IMAC或TiO2）来富集磷酸化的肽段。这些富集方法能够特异性地

• • 为什么用Alix蛋白抗体，实验WB上样细胞裂解液会显示两个条带？哪个为准？

  使用Alix蛋白抗体在Western Blot（WB）实验中出现两个条带可能有以下原因： 1、蛋白质同源异构体： Alix蛋白可能存在不同的同源异构体，这些异构体在分子量上略有不同，从而在凝胶上表现为不同的条带。 2、蛋白质降解产物： 如果Alix蛋白在细胞裂解过程中部分降解，这可能导致

• • wb实验时蛋白加热变性后有沉淀

  在Western Blot (WB) 实验中，蛋白质加热变性后出现沉淀是一个常见问题。通常由以下几个因素引起： 1.蛋白质浓度过高： 如果样品中的蛋白质浓度过高，加热时可能会导致蛋白质过度聚集和沉淀。 2.样品缓冲液不适当： 使用的样品缓冲液可能不适合所分析的蛋白质。例如，缓冲液的pH值

• • Wnt3a 蛋白建议的转膜及电泳条件？

  Wnt3a是一种疏水性强的蛋白质，其正确的转膜和电泳条件对于成功的Western Blot实验至关重要。 1、电泳条件： Wnt3a蛋白的分子量约为39 kDa，因此建议使用10%或12%的聚丙烯酰胺凝胶。 建议在恒压模式下进行电泳，开始电压可设置为80-100伏特，直至样品进入分离凝胶

• • 用一定浓度的乙醇回流提取样品时，过滤浓缩好是进行冻干再上液相测量好，还是旋转浓缩好直接上液相测量好？

  在使用一定浓度的乙醇进行样品提取后，接下来如何处理样品以进行液相色谱（HPLC）测量，通常取决于样品的性质和实验的具体要求。这里有两种常见的方法：冻干和旋转蒸发（旋转浓缩），每种都有其优势和局限性。 一、冻干： 1.优势： 冻干可以非常有效地去除所有溶剂，特别适用于热敏感物质。这种方法不

• • 为什么有些蛋白在肿瘤组织中高表达却在血液中低表达或检测不到？

  蛋白质在肿瘤组织中高表达而在血液中低表达或检测不到的现象可能由多种因素引起： 1.组织特异性表达： 有些蛋白质可能在特定组织中高表达，如肿瘤组织，但在血液中的表达水平较低。这是由于蛋白质的生物学功能和表达调控机制决定的。 2.血液稀释效应： 即使肿瘤细胞产生大量的特定蛋白质，这些蛋白质释

• • 如何根据图谱看蛋白大小

  在进行SDS-PAGE时，通常会在凝胶的一侧跑一个分子量标准（Molecular Weight Marker），这是一系列已知分子量的蛋白质。这些标准蛋白质在电泳后会形成一系列条带，每个条带对应一个特定的分子量。 将样品和分子量标准一起进行SDS-PAGE电泳，电泳结束后，观察样品在凝胶上

• • 请问免疫共沉淀Co-IP后能够做定量比较吗？

  免疫共沉淀（Co-IP）实验后通常不适合直接用于定量比较，因为此技术主要用于检测蛋白质间的相互作用，而不是蛋白质的表达量。Co-IP更多地被视为一种定性方法，用于确认蛋白质之间是否存在相互作用。 如果需要进行定量比较，可以考虑使用免疫印迹（Western Blot）等其他方法来补充Co-I