忘加loading煮沸后加loading煮5分钟冷冻，下次稀释多少倍合适？稀释后需补加loading并煮沸吗？

1.建议稀释2-5倍。具体稀释比例取决于你的样品浓度和实验要求，通常需要稀释至总蛋白浓度的1-2 µg/µL，以确保电泳结果的准确性和可重复性。

2.稀释后需要补加1X加载缓冲液（loading buffer）。补加loading buffer可以确保样品在电泳时能够正常迁移，并且溴酚蓝染料有助于监控电泳进程。

3.补加loading buffer后需要再次煮沸1-2分钟。再次煮沸有助于确保蛋白质完全变性，从而避免在电泳过程中出现不完整的蛋白条带或异常迁移现象。