请教一下blue native page的protocol
Blue Native PAGE (BN-PAGE) 的实验操作流程主要包括以下步骤:
1.样品准备:
使用温和的洗涤剂(如digitonin或n-dodecyl β-D-maltoside)在4°C条件下裂解细胞,以提取蛋白质复合物。
2.蛋白质提取:
通过离心去除细胞残留和碎片,收集上清液。
3.样品缓冲:
将蛋白样品与一定量的G-250染料混合,避免蛋白质复合物解离,同时增加其负电荷。
4.电泳:
在4-16%的聚丙烯酰胺梯度凝胶上进行电泳,用低温冷却系统维持温度。
5.染色与分析:
电泳结束后用Coomassie Brilliant Blue染色,进行蛋白质带的可视化,然后可以进一步进行质谱分析以识别蛋白质。
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