1D SDS-PAGE和IEF服务

百泰派克生物科技提供一站式蛋白质凝胶服务相关解决方案,包括SDS-PAGE、IEF和Native PAGE分析。

1D SDS-PAGE服务

聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)是分离大分子最常用的技术之一,包括DNA,RNA和蛋白质。电泳过程是通过施加电场作用使带电离子进行迁移的过程。在该技术中,带电分子的迁移率与其净电荷和通过的溶液的电阻成正比。十二烷基硫酸钠(SDS)是一种阴离子去污剂,溶解过程中,其分子在较广pH范围内具有净负电荷。多肽链与其相对分子质量成比例地结合一定数量的SDS,SDS上的负电荷破坏蛋白质的大多数复杂结构。

百泰派克提供1D SDS-PAGE和IEF服务

1D SDS-PAGE

将蛋白质混合物添加到凝胶上样空中后,可能会出现最大的蛋白质还没有迁移到凝胶上时,最小的蛋白质在已经跑出了凝胶的现象。因此为了获得更好的分离效果,利用凝胶的特性,将凝胶分为浓缩胶和分离胶两层的方法能够解决该问题。PAGE胶底部是较大的分离胶,顶部是较窄的浓缩胶。电泳缓冲液由甘氨酸制成,pH 8.3,浓缩胶的pH值为6.8,而分离凝胶的pH值为8.8。电泳期间,电流由带负电荷的分子携带向同一个方向迁移。由于在pH 8.3时仅有约10%的甘氨酸分子带负电荷,因此此处的电流主要由堆积缓冲液中的Cl-携带,Cl-离子赶在蛋白质之前朝堆积凝胶底部堆积。从而使得由SDS包裹的蛋白质分子被夹在位于上方的甘氨酸分子和下方的Cl-之间,并被浓缩成比最初加载的体积小得多的条带。

随着电流作用绩效迁移,蛋白质迁移到分离胶中。此时,pH为8.8的分离凝胶缓冲液中的甘氨酸成为带负电荷的分子,能够非常快速的迁移,几乎与Cl-离子保持一致,而蛋白质紧随其后。此时蛋白质经由Cl-和甘氨酸阴离子的移动轨迹进入分离凝胶而携带电流。蛋白质变成一种具有类似流体动力学性质的杆状带负电荷高分子,其迁移率仅取决于其分子质量。

SDS-PAGE广泛应用于蛋白质组学分析,包括蛋白质分子量测定蛋白质鉴定,样品纯度分析,二硫键鉴定蛋白质定量等。

等电聚焦IEF分析服务

等电聚焦(IEF)是一种基于蛋白质等电点(pI)分离蛋白质的一种电泳技术。当pI=PH时,蛋白质净电荷为0,因此蛋白质不会在电场中迁移。在IEF中,蛋白质的分离是在含有两性电解质混合物的聚丙烯酰胺或琼脂糖凝胶中进行的,两性电解质在电场中迁移并在凝胶中形成pH梯度。蛋白分子被集中在一个具有pH梯度的介质中,通过介质的电流将产生带正电荷的氧化极和带负电荷的还原极。带电的蛋白质分子会向与其有相反电荷的一极运动,直到与周围pH值与其等电点相同时带电分子才停止在凝胶中运动,即蛋白质净电荷为0时。


于是,具有相同等电点的蛋白质集中在pH固定的条带中。每种蛋白质都位于pH梯度中与其pI相对应的位置。IEF技术具有极高的分辨率,即使仅有一个电荷不同的蛋白质,也会被分到不同的条带。

百泰派克提供等电聚焦IEF分析服务

等电聚焦IEF分析

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