2D Blue Native/SDS-PAGE复合物分析：求一个protocol

2D Blue Native/SDS-PAGE 是一种用于分析蛋白复合物和其亚单位组成的技术。以下是该技术的基本实验流程，希望对你有所帮助。

 

1.样本准备：

提取蛋白样本，并使用适当的缓冲液（如含有一定浓度的Digitonin或者Triton X-100的缓冲液）稳定蛋白复合物。

 

2.第一维：Blue Native PAGE：

• 准备Blue Native PAGE胶（通常为4-16%梯度胶）。
• 将蛋白样本与Coomassie蓝G-250染料混合，避免使用含硫酸盐的缓冲液。
• 装载样本并在4°C下进行电泳，使用适当的阴极和阳极缓冲液。

 

3.胶带切割与处理：

• 完成第一维电泳后，沿着胶的长度方向切割出含有蛋白带的胶条。
• 将胶条在含SDS的缓冲液中轻轻摇动，以便于SDS渗透。

 

4.第二维：SDS-PAGE：

• 将处理过的胶条置于SDS-PAGE胶上（通常为12-20%梯度胶）。
• 进行SDS-PAGE电泳，以分离蛋白复合物的各个亚单位。

 

5.蛋白染色与图像分析：

• 使用Coomassie蓝或银染对SDS-PAGE胶进行染色。
• 使用图像分析软件分析蛋白斑点，确定蛋白复合物的亚单位组成。

 

6.数据解释：

根据蛋白斑点的迁移率和大小，推断可能的蛋白复合物亚单位。

 

此外，可以根据具体的实验条件和蛋白质的特性进行适当的调整。

 

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