请问跑泛素化应该配多大浓度的胶,转膜的电流大小及时间是多少,以及PVDF膜用0.45还是0.22?
1、凝胶的浓度:
对于大多数蛋白质,使用 8-12% 的SDS-PAGE凝胶是比较常见的。如果目标蛋白较小(<20 kDa)或者非常大(>200 kDa),可能需要使用更高或更低浓度的凝胶。
2、电泳的电流和时间:
通常情况下,电泳的电流设置为常电流(constant current)模式,电流大小一般为 15-25 mA(每个凝胶槽)。电泳时间取决于凝胶的厚度和蛋白的大小,通常在1-2小时之间。
3、PVDF膜的孔径:
0.45 µm 和 0.22 µm 是两种常用的PVDF膜孔径。对于大多数应用,0.45 µm 的孔径足够了。如果目标蛋白非常小,使用 0.22 µm 孔径的膜可以提高蛋白的捕获效率。
这些参数可能需要根据您的特定实验条件进行优化,建议您参考蛋白质印迹试剂盒的说明书或相关的科学文献,以获取最准确的实验设置。
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