蛋白分析FAQ汇总

• • 样品在-20℃存放3个月，对检测会有影响吗？

  对于大多数生物学和化学样品，-20℃的存储在三个月内一般不会对检测结果产生显著影响。当然，具体情况还是取决于样品类型和检测方法。生物样品（如DNA、RNA、蛋白质）通常可以在-20℃下长期存储而不影响后续的分子生物学检测，如PCR、西方印迹或酶联免疫吸附测定（ELISA）。然而，重复的冻融循

• • 提豆酱多肽里面还有食盐，需要脱盐吗？怎么脱呢？

  从豆酱提取的多肽中如果含有食盐，通常情况下是需要脱盐的。这是因为食盐（氯化钠）可能会影响多肽的纯度和稳定性，尤其是在用于某些特定的生物学或化学分析时。脱盐可以通过多种方法进行，主要的脱盐技术包括： 1.透析法： 这是一种常见的脱盐方法，通过使用半透膜来分离小分子的盐和大分子的多肽。透析袋中

• • 做蛋白组分液相分析，溶剂是0.1%TFA，流动相是0.1%TFA与乙腈，但是5min内总是会出现远远高于目标峰的峰是为什么呀？

  在蛋白质组学的液相色谱分析中，如果在5分钟内出现远高于目标峰的峰，这种情况有几个可能的原因： 1.系统峰或基线漂移： 在分析的初始阶段，由于流动相中的溶剂组分与色谱柱的平衡，可能会产生较大的系统峰。特别是在使用含有有机溶剂（如乙腈）和0.1%三氟乙酸（TFA）的流动相时，这种现象更为常见。

• • wb目的条带连成一条，内参正常，可能原因

  如果您的 WB（Western Blot）目的条带连成一条，但内参正常，可能的原因包括： 1.过度加载样本： 如果您加载的目标蛋白质样本过多，它们的条带可能会连成一条，因此请确保加载适量的样本。 2.抗体亲和力过强或浓度过高： 使用的一抗或二抗过于亲和或浓度设置得过高，导致过度染色。

• • 请问，WB电泳的时候，蛋白的上样量为什么是20ug-30ug，蛋白量过多过少会怎么样？蛋白上样量是与WB的测定目的有关吗？

  Western Blot（WB）实验中，蛋白的上样量通常建议在20μg-30μg之间，因为这个量级通常能保证足够的蛋白量以获得清晰的条带，同时又不至于过多导致信号饱和或条带模糊。如果蛋白量过多，可能导致信号过强、条带模糊，甚至可能出现条带堆积的现象；如果蛋白量过少

• • western blot 分离胶对应的浓度与蛋白大小（KD）的关系是怎么样的呢

  Western blot中，分离胶的浓度与蛋白质大小（kDa）的关系基本上是：分离胶的浓度越高，其分离的蛋白质分子量范围越小。具体来说： 1.低浓度的胶（比如5%）更适合分离大分子量的蛋白质（比如大于200 kDa）。 2.中等浓度的胶（比如10%-12%）通常用于分离中等分子量范围的蛋

• • 转膜过程前，为什么需要用转膜缓冲液浸泡膜啊？

  在转膜过程中使用转膜缓冲液浸泡膜是出于几个关键原因： 1.膜的活化： 某些膜材料，如硝酸纤维素或聚偏氟乙烯（PVDF），需要通过缓冲液活化以提高其亲和力，确保蛋白质有效地从凝胶转移到膜上。 2.防止干燥： 保持膜的湿润状态防止在转膜过程中干燥，干燥的膜可能导致蛋白质转移不均匀或效率降低。

• • WB出现过曝光的条带是为什么？有什么解决办法吗？

  Western blot出现过曝光的条带通常是由于曝光时间过长或者抗体浓度太高所导致。解决这个问题的办法包括： 1.调整曝光时间： 减少曝光时间，尤其是在使用化学发光检测系统时。 2.优化抗体浓度： 降低一抗或二抗的浓度。 3.洗涤步骤： 增加膜的洗涤次数或时间，以减少非特异性结合。

• • WB电泳样品孔中加样量一般是多少，这是根据什么来设定的，过多或过少又会导致什么后果诶

  免疫印迹(Western Blot, WB)电泳中样品孔加样量的确定取决于几个因素，主要包括凝胶的尺寸、孔的容积、样品的浓度和所需检测的蛋白质的丰度。通常，加样量范围在10到30微升之间。 如果加样量过多，可能会导致以下后果： 1.样品溢出： 样品可能会从一个孔溢出到相邻的孔，导致结果混

• • 目前已经用His标签纯化了目的蛋白A。做Co:Ip时，可不可以用myc标签纯化另一个蛋白，然后做co,ip实验？

  可以的。使用His标签纯化目的蛋白A之后，您完全可以使用Myc标签来纯化另一个蛋白，然后进行共免疫沉淀（Co-IP）实验。这种方法允许您特异性地识别和纯化两种不同的蛋白，从而使得Co-IP实验更加精确和可靠。在实验中，您可以用抗Myc抗体捕获Myc标签蛋白，然后检测是否有His标签的蛋白A与