蛋白分析FAQ汇总

• • 蛋白质谱实验中常见故障排除指南

  问1：样品中是否表达了蛋白质？ 答：通过免疫印迹法（Western Blot）检查起始样品（即，在细胞收获后直接检查）。 问2：蛋白质是否在实验过程中，即样品处理过程中丢失？ 答：在每个实验步骤中定期取样，以确保蛋白质存在于样品中（通过免疫印迹法进行验证）。

• • 想要研究某个固定蛋白的翻译后修饰，可以通过什么方法检测呢？

  可以通过以下方法检测： 1. 质谱法：通过高通量蛋白质组学分析，可以检测蛋白质磷酸化、乙酰化、泛素化等多种翻译后修饰。 2. 西方印迹（Western blot）：使用特异性抗体，可以检测特定的翻译后修饰，如磷酸化、乙酰化等。 3. 免疫荧光显微镜：使用特异性抗体，可以在细胞中定位特定的翻译

• • 糖基化位点预测是用什么软件做的？做出来怎么看？

  糖基化位点预测通常使用专门的生物信息学软件或在线服务器。比如NetNGlyc、GlycoEP、NetOGlyc等，这些工具可以预测蛋白质序列中的N-连接糖基化和O-连接糖基化位点。使用这些软件或服务时，你需要输入你感兴趣的蛋白质序列。这些工具会分析序列，识别潜在的糖基化位点，并给出每个位点的

• • 戊二醛交联的步骤？有具体protocol吗？

  戊二醛（Glutaraldehyde）交联是一种常用的化学交联方法，用于固定和稳定蛋白质和其他生物大分子。以下基本的戊二醛交联步骤概述：   1.预处理样品： 将样品（如细胞或组织）清洗，使用PBS（磷酸盐缓冲盐水）或其他适当的缓冲液去除杂质。   2.准备戊二醛溶液： 根据需要，将戊二醛稀

• • 请问盐分的存在对薄层展开有什么影响？

  盐分的存在可以显著影响薄层展开（薄层色谱）的过程，主要表现为：   1.改变溶剂极性，影响样品分离。 2.调节样品的溶解度，影响迁移速度。 3.改变固定相的吸附特性，影响样品与固定相的相互作用。 4.调整溶剂的离子强度，影响色谱分离效果。   百泰派克生物科技--生物制品表征，多组学生物质谱

• • 请问脂酰化蛋白提取需要什么特殊方法？市面上有脂酰化蛋白的抗体吗？

  脂酰化蛋白提取通常需要使用可以保持脂酰基团稳定的缓冲液和条件，因为脂酰化（如肌醇酰化、棕榈酰化等）是可逆的并且对处理条件敏感。提取中需注意：1）使用含有脂酰化抑制剂的缓冲液：为了保护脂酰化修饰不被酶解，需要在提取过程中使用含有脂酰化抑制剂（如羟肟酸）的缓冲液。2）使用特定洗涤和沉淀步骤：以确

• • 进行二维电泳的时候sds胶是一样有浓缩胶和分离胶吗？

  是的，在进行二维电泳时，SDS-PAGE步骤同样包括浓缩胶和分离胶。浓缩胶用于集中样品中的蛋白，而分离胶则用于按照蛋白的分子量进行分离。   百泰派克生物科技--生物制品表征，多组学生物质谱检测优质服务商   相关服务： 二维凝胶电泳服务

• • 想了解bluenative page实验以及二向BN-SDS-PAGE的步骤，还有阴阳缓冲液。

  一、Blue Native PAGE (BN-PAGE) 实验材料和溶液 样品缓冲液（阴性缓冲液）: 50 mM Bis-Tris (pH 7.0), 50 mM NaCl, 10% (w/v) 甘油, 0.001% Ponceau S, 加入一定量的Coomassie Blue G-2

• • 用trizol提的蛋白可以做组蛋白甲基化的wb吗？

  使用TRIzol提取的蛋白理论上可以用于Western Blot（WB）分析。Trizol（或类似的基于酚-氯仿的提取剂）是一种多功能的提取试剂，能够同时提取RNA、DNA和蛋白质。对于蛋白质提取，特别是组蛋白这类与染色质紧密相关的蛋白质，Trizol提取可以保留其翻译后修饰，如甲基化。但是

• • 糖基化蛋白怎么看？

  基化蛋白的检测和分析可以通过多种方法进行，主要取决于你想要了解的糖基化类型（如N-糖基化或O-糖基化）以及糖基化的具体位置和结构。常用的方法主要包括： 1.质谱分析（Mass Spectrometry, MS）： 质谱是分析糖基化蛋白的强大工具，尤其是在鉴定糖基化位点和糖链结构方面。