我想做蛋白质质谱分析，请问有没有切胶的方法？

在蛋白质质谱分析中，切胶是提取目标蛋白的重要步骤。以下是进行切胶的方法步骤及注意事项：

 

一、准备材料和试剂

1、材料

（1）去污后的刀片或镊子（最好使用灭菌的一次性刀片或镊子）。

（2）明胶染色后的SDS-PAGE凝胶（如考染、银染或荧光染色）。

（3）无酶超纯水（Milli-Q水）。

（4）1.5 mL低蛋白吸附离心管。

 

2、试剂

（1）25 mM NH₄HCO₃（碳酸氢铵缓冲液，质谱级）。

（2）乙腈（Acetonitrile, HPLC级）。

（3）10 mM DTT（在25 mM NH₄HCO₃中溶解）。

（4）55 mM碘乙酰胺（Iodoacetamide，IAA，在25 mM NH₄HCO₃中溶解）。

（5）胰蛋白酶溶液（Trypsin，质谱级）。

 

二、操作方法

1. 准备与切胶：用灭菌刀片切取目标蛋白条带（1 mm³），放入低吸附离心管。

2. 脱色与处理：用50%乙腈/25 mM NH₄HCO₃脱色，去除染料；用10 mM DTT还原二硫键，再用55 mM IAA烷基化避免复原。

3. 酶解与提取：加入胰蛋白酶溶液（10-20 ng/µL），冰浴吸附后37℃酶解12-16小时；提取肽段，合并上清并浓缩。

4. 样品重溶：用0.1% TFA溶解干燥的肽段样品，准备质谱分析。

 

三、注意事项

确保工具和试剂洁净无污染，脱色彻底，胰蛋白酶活性稳定，避免外源干扰。

 

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