蛋白分析FAQ汇总

• • WB蛋白提取时进了冰会对实验有影响吗？

  如果在蛋白质提取过程中不小心混入了冰盒里的冰，可能会影响蛋白质样品的浓度和纯度： 1.稀释效应：冰在融化后会增加液体的体积，从而稀释了样品。这可能导致蛋白质的浓度降低。 2.样品污染：虽然较为少见，但如果冰是在非无菌条件下制备的，那么可能会引入微生物或其他污染物。 对于大多数Western

• • 真核过表达目的蛋白WB检测不到如何解决？

  当在真核系统中过表达目的蛋白，但在Western Blot (WB) 检测中检测不到该蛋白时，可能有许多原因。以下是一些建议和策略，帮助您诊断和解决这一问题： 1.检测方法问题： 确保WB实验操作步骤正确，包括蛋白样品的制备、电泳分离、转膜和抗体探针的使用等。 检查蛋白样品的浓度是否适当

• • WB蛋白加入loading buffer配好后没有煮变性，直接放到-80冰箱冻起来了会降解吗？

  当WB蛋白加入loading buffer配好后，如果没有经过煮变性处理，直接放到-80℃冰箱冻起来，一般情况下不会导致蛋白的降解。 WB蛋白的加载缓冲液（loading buffer）通常包含一定浓度的还原剂（如β-巯基乙醇）和SDS（十二烷基硫酸钠），这些成分有助于蛋白质的变性和解离。在

• • 表达出的蛋白跑WB比预测的小，这是为什么呢？

  当蛋白质在Western blot（WB）实验中跑得比预测的小，可能有以下几个原因： 1.蛋白质修饰：蛋白质在细胞内可能会经历多种修饰，如磷酸化、甲基化、乙酰化等。这些修饰可以改变蛋白质的电荷、空间构象和分子量，从而影响其迁移速度。如果蛋白质发生了修饰，可能会导致其在SDS-PAGE凝胶中

• • 两个蛋白WB时共用了内参，但作图两个蛋白分别在两张图，这种可以用同一内参吗？

  当你在Western Blot (WB) 实验中使用内参蛋白（例如 GAPDH、β-actin 等）来对两个目的蛋白进行标准化时，理论上，只要你确保了以下几点，即使两个蛋白被分别展示在两张图中，你也可以使用相同的内参蛋白： 来自同一样品：确保两个目的蛋白与内参蛋白都是来自同一份细胞裂解液

• • WB计算出蛋白样品浓度后操作原理是什么？

  当使用Western Blot（WB）技术来检测蛋白质表达水平时，我们需要先确定蛋白样品的浓度。这是因为在WB实验中，我们需要加载相同数量的蛋白样品到凝胶上，以确保结果的可比性和准确性。下面是WB计算蛋白样品浓度的操作原理： 理论基础：WB计算蛋白样品浓度的原理是根据比色法或荧光法测定蛋

• • 在进行WB实验时，提取蛋白为什么要加蛋白酶和抑制剂？

  在进行 Western Blot (WB) 实验时，提取蛋白质的过程中加入蛋白酶和抑制剂有以下原因： 1.蛋白酶的加入： 蛋白酶的存在可能会降解目标蛋白质，因此在提取蛋白质的过程中加入蛋白酶可以防止蛋白质的降解。 蛋白酶可以降解细胞内的蛋白质，包括细胞膜上的受体蛋白、细胞骨架蛋白等。通过

• • WB条带跑得很粗为什么，感觉好像蛋白和loading分开了?

  当Western blotting（WB）条带跑得很粗时，可能有几个原因导致蛋白和loading分开的现象。下面我将逐步解答这个问题。 蛋白负载量过高：如果在样品中加载了过多的蛋白负载量，条带可能会变得很宽。这是因为过多的蛋白负载量会导致蛋白在凝胶中扩散，使得条带变得模糊不清。解决这个问

• • SDS-PAGE凝胶电泳测真菌蛋白，最后洗脱后没有条带，而是成团？

  SDS-PAGE凝胶电泳是一种常用的蛋白质分离和分析技术，可以根据蛋白质的分子量将其分离成不同的条带。如果在测定真菌蛋白时，没有观察到条带而是成团的现象，可能有以下几个原因： 样品加载量过高：如果加载的真菌蛋白样品过多，可能会导致蛋白质在凝胶中聚集成团，而不是形成清晰的条带。在进行SDS

• • 为啥我跑sds-page的时候不是一直线?我用乙醇沉淀蛋白，碳酸氢铵复溶?

  SDS-PAGE 是一种常用的蛋白质分离技术，用于根据蛋白质的分子量进行分离。如果你的结果不是一条直线，可能有以下几个原因： 样品加载量过多或过少：如果你加载的样品量过多，可能会导致带状模糊或重叠；如果加载的样品量过少，可能会导致带状模糊或信号弱。建议优化样品加载量，使其适中。 样品预处理