蛋白分析FAQ汇总

• • 用SDS-凝胶电泳法测定蛋白质分子量时，有哪些注意事项？

  SDS-PAGE凝胶电泳法是测定蛋白质分子量最常用最简单的方法，其实验结果也容易受到多方面的影响，因此操作时也需要注意以下注意事项： 样品制备： 确保蛋白质完全变性：在样品中加入适量的SDS和减少剂（如β-mercaptoethanol或DTT）并在推荐的温度下加热一定时间，以确保蛋

• • 变构酶蛋白质分子能用SDS 酰胺电泳吗？

  是的，变构酶（chaperone）蛋白质也可以使用SDS-PAGE进行分析。变构酶蛋白质是一类帮助其他蛋白质正确折叠或再折叠的蛋白质。它们的功能包括防止蛋白质聚集、协助蛋白质变性和重组以及与部分未折叠的蛋白形成稳定的复合物。 当使用SDS-PAGE对变构酶蛋白进行分析时，这些蛋白质会被SDS

• • 在进行蛋白质的凝胶电泳时，加SDS和不加SDS的电泳体系是有区别的，请按照电泳全过程，阐述二者区别？

  进行蛋白质的凝胶电泳时，加入SDS（十二烷基硫酸钠）和不加SDS的电泳体系的区别如下： 1.样品处理： 加SDS的电泳体系：在样品处理过程中，加入SDS可以使蛋白质分子的电荷变得均匀，同时也会使蛋白质分子变得线性，解开其原有的二级和三级结构。 不加SDS的电泳体系：在样品处理过程中，不加

• • 266KDa的蛋白具体怎么电泳？浓缩胶和分离胶分别用多大浓度的？用湿法转膜用多大的电压或电流？

  对于266KDa的蛋白电泳，常用的方法是聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）。下面是详细的步骤和参数设置： 准备样品：将蛋白样品加入含有SDS和还原剂（如β-巯基乙醇）的样品缓冲液中，并在100°C的水浴中加热5分钟，使蛋白质完全变性和解聚。 准备凝胶：使用聚丙烯酰胺凝胶，通常是8-1

• • 关于western blot蛋白胶制备谁知道这怎么回事，最边上总有很多气泡，其它正常，跪求各位大神?

  当进行Western blot蛋白胶制备时，出现边上有很多气泡的情况可能是由于以下几个原因导致的： 1.胶液制备过程中的气泡：在制备聚丙烯酰胺凝胶的过程中，如果胶液没有充分混合或者搅拌不均匀，就会导致气泡的产生。为了避免这种情况，可以在制备胶液时充分搅拌，并且使用胶液前将其静置一段时间，让

• • WB实验什么时候煮蛋白？

  "煮蛋白"（或称为“沸腾样品”）是指将蛋白样品在高温下加热一段时间，以实现蛋白质的变性，这通常涉及到将含有蛋白质的样品与一个含有SDS和减少剂（如β-mercaptoethanol或DTT）的加载缓冲液混合，并在沸水浴中加热5-10分钟。 一般在SDS-PAGE凝胶电泳之前，样品提取完成并

• • 大分子蛋白（220kd）wb怎么跑出清晰的条带？

  大分子蛋白（如220 kDa）在Western Blot（WB）中有时可能难以获得清晰的条带，因为这些蛋白质的迁移和转移可能会受到影响。希望以下建议可以帮助您在进行大分子蛋白WB电泳时获得清晰的条带： 凝胶选择： 使用较低浓度的凝胶（例如6%或8%）来增加孔隙大小，从而更好地解决大分子

• • 你知道『WB实验蛋白提取』常用到的蛋白类型有哪些吗？

  当进行WB实验蛋白提取时，常用到的蛋白类型有以下几种： 细胞全蛋白（Total cell lysate）：这是最常见的蛋白提取方式，通过裂解细胞膜和核膜，将细胞内的所有蛋白提取出来。这种提取方式适用于研究细胞内的总体蛋白表达情况。 细胞核蛋白（Nuclear protein）：通过细胞裂

• • 『WB实验』蛋白信号弱或者无信号是什么原因?

  当 WB 实验中蛋白信号弱或者无信号时，可能有以下几个原因： 1.样品制备问题： 蛋白质含量不足：样品中的蛋白质含量可能过低，无法产生足够的信号。可以尝试增加样品的蛋白质含量，例如通过增加细胞数或组织量来提高蛋白质的浓度。 样品处理不当：样品在制备过程中可能受到不适当的处理，例如长时间的

• • 为啥WB跑蛋白的时候，样品连成一条线了？

  当进行WB实验时，样品在膜上连成一条线的现象是由于蛋白质在电泳分离和转移过程中的堆积效应以及蛋白质的连续性所导致的。这种现象在一些情况下可能会对实验结果的解读产生影响，因此在进行WB实验时，需要注意样品的加载量和电泳条件的优化，以确保蛋白质在凝胶和膜上的分离和转移效果最佳。 1.蛋白质电泳