蛋白分析FAQ汇总

• • 用SDS-PAGE法可以测定血红蛋白的分子量嘛？

  当然可以使用SDS-PAGE法来测定血红蛋白的分子量。SDS-PAGE法是一种常用的蛋白质分析方法，通过电泳分离蛋白质，根据其迁移速度来确定蛋白质的分子量： 首先，需要将血红蛋白样品进行处理。由于血红蛋白是一种带有负电荷的蛋白质，为了使其在电泳过程中能够均匀地分散在凝胶中，需要将其与SD

• • SDS凝胶电泳测定蛋白质分子量时，为什么老师要我们两边不要点样(说什么倒电作用)，求大神解答?

  SDS凝胶电泳通过电泳将蛋白质分离并测定其分子量。在这个过程中，SDS（十二烷基硫酸钠）被用来给蛋白质样品添加负电荷，使其在电场中向阳极迁移。在SDS凝胶电泳中，电泳缓冲液中的离子会在电场作用下向阳极或阴极迁移。当样品点在凝胶两边时，电泳缓冲液中的离子会在样品点周围聚集，形成电场梯度。这个电

• • SDS蛋白条带太细了，也能够鉴定蛋白吗？

  蛋白质条带的宽度或明显度并不直接决定其鉴定的可行性。主要的考虑因素是: 条带的定量：即使条带很细，如果蛋白质的量足够多，仍然可以进行进一步的分析，例如通过质谱分析进行鉴定。 背景：如果背景很清晰，即使条带很细，也可能很容易地将其与背景区分开来。 鉴定方法的灵敏度：使用质谱进行蛋白

• • 凝胶色谱法分离蛋白质的原理是什么？

  凝胶色谱法（也称为凝胶渗透色谱、凝胶过滤色谱或分子筛色谱）是一种常用的蛋白质分离和纯化技术，其原理基于蛋白质在凝胶介质中的分子大小和形状的差异。 凝胶色谱法使用的凝胶介质通常是由聚丙烯酰胺或琼脂糖等物质制成的，可以形成一种三维网络结构。凝胶介质的孔径大小决定了蛋白质在凝胶中的分子扩散速率，

• • 圆二色谱的数据可以用哪些软件计算出多肽的不同二级结构所占比例呢？

  当使用圆二色谱技术研究蛋白质的二级结构时，可以使用多种软件来计算不同二级结构所占的比例： 1.DICHROWEB：DICHROWEB是一个在线工具，可以用于分析圆二色谱数据并预测蛋白质的二级结构。它基于多个已知的二级结构数据库和算法，可以根据输入的圆二色谱数据给出二级结构的预测结果。 2

• • 凝胶色谱法提取血红蛋白时，一定是大分子先出来吗，有没有可能少量小分子一起出来，这个方法严谨吗？

  凝胶色谱法是一种常用的蛋白质分离和纯化方法，它基于蛋白质在凝胶柱中的分子大小和形状的差异进行分离。在凝胶色谱法中，大分子通常会先出来，但也有可能少量小分子与大分子一起出来。下面我将详细解答你的问题： 1.凝胶色谱法的原理：凝胶色谱法是基于分子在凝胶柱中的分子大小和形状的差异进行分离的。凝胶

• • 离子交换色谱提纯蛋白质的分辨率有多好？

  离子交换色谱（Ion Exchange Chromatography，简称IEC）是一种常用的蛋白质分离和纯化技术。它利用固定在色谱柱上的离子交换基团与蛋白质中的带电氨基酸残基之间的相互作用来实现分离。分辨率是衡量色谱技术分离效果的重要指标，它反映了样品中不同组分之间的分离程度。 1.分辨

• • 为什么我跑WB的内参还可以，但是目的蛋白总是看不清？

  WB实验中，如果内参蛋白（通常是稳定表达的蛋白，如 GAPDH 或 β-actin）的信号是正常的，但是你的目的蛋白（你想要检测的特定蛋白）的信号却看不清。这可能有多种可能的原因，我会尝试列举一些可能的原因，并提供一些可能的解决方案。 一、抗体问题： 1.选择的抗体可能不够特异：如果你的

• • WB跑过氧化物酶体蛋白，内参可以用过氧化氢酶嘛？

  这个问题的答案取决于你的实验设计和你想要研究的问题。以下是一些可能的考虑因素： 1. 蛋白表达稳定性：内参蛋白的选择应该基于其在你的实验条件下的稳定表达。过氧化氢酶在许多组织和细胞类型中都有表达，但是其表达水平可能会受到氧化应激等因素的影响。如果你的实验设计涉及到这些因素，那么过氧化氢酶可

• • WB跑TLR4和NF-kB这两个蛋白 条带反亮怎么办，已经降低二抗的浓度了。actin 是正常的？

  这种情况可能是由于多种原因造成的： 1. 二抗过量：如果你已经尝试降低二抗的浓度，然而问题仍然存在，你可能需要进一步降低二抗的浓度，或者尝试使用不同的二抗。 2. 一抗过量：如果二抗的浓度已经足够低，那么可能是一抗的浓度过高。尝试降低一抗的浓度，看看是否能改善结果。 3. 孵育时间过长