蛋白分析FAQ汇总

• • 大分子蛋白（220kd）wb怎么跑出清晰的条带？

  大分子蛋白（如220 kDa）在Western Blot（WB）中有时可能难以获得清晰的条带，因为这些蛋白质的迁移和转移可能会受到影响。希望以下建议可以帮助您在进行大分子蛋白WB电泳时获得清晰的条带： 凝胶选择： 使用较低浓度的凝胶（例如6%或8%）来增加孔隙大小，从而更好地解决大分子

• • 你知道『WB实验蛋白提取』常用到的蛋白类型有哪些吗？

  当进行WB实验蛋白提取时，常用到的蛋白类型有以下几种： 细胞全蛋白（Total cell lysate）：这是最常见的蛋白提取方式，通过裂解细胞膜和核膜，将细胞内的所有蛋白提取出来。这种提取方式适用于研究细胞内的总体蛋白表达情况。 细胞核蛋白（Nuclear protein）：通过细胞裂

• • 『WB实验』蛋白信号弱或者无信号是什么原因?

  当 WB 实验中蛋白信号弱或者无信号时，可能有以下几个原因： 1.样品制备问题： 蛋白质含量不足：样品中的蛋白质含量可能过低，无法产生足够的信号。可以尝试增加样品的蛋白质含量，例如通过增加细胞数或组织量来提高蛋白质的浓度。 样品处理不当：样品在制备过程中可能受到不适当的处理，例如长时间的

• • 为啥WB跑蛋白的时候，样品连成一条线了？

  当进行WB实验时，样品在膜上连成一条线的现象是由于蛋白质在电泳分离和转移过程中的堆积效应以及蛋白质的连续性所导致的。这种现象在一些情况下可能会对实验结果的解读产生影响，因此在进行WB实验时，需要注意样品的加载量和电泳条件的优化，以确保蛋白质在凝胶和膜上的分离和转移效果最佳。 1.蛋白质电泳

• • 检测目的蛋白用WB就可以了吧，为什么要用免疫沉淀呢，不太懂，望大神讲解一下？

  Western Blot (WB) 和免疫沉淀 (IP) 是两种不同的技术，每种技术都有其特定的应用和优点。尽管两者都涉及到抗体的使用，但它们的目的和所提供的信息是不同的。 Western Blot (WB)： 主要目的：确定特定蛋白质是否存在于样品中，以及估计其相对丰度。 提供的信息

• • WB蛋白提取时进了冰会对实验有影响吗？

  如果在蛋白质提取过程中不小心混入了冰盒里的冰，可能会影响蛋白质样品的浓度和纯度： 1.稀释效应：冰在融化后会增加液体的体积，从而稀释了样品。这可能导致蛋白质的浓度降低。 2.样品污染：虽然较为少见，但如果冰是在非无菌条件下制备的，那么可能会引入微生物或其他污染物。 对于大多数Western

• • 真核过表达目的蛋白WB检测不到如何解决？

  当在真核系统中过表达目的蛋白，但在Western Blot (WB) 检测中检测不到该蛋白时，可能有许多原因。以下是一些建议和策略，帮助您诊断和解决这一问题： 1.检测方法问题： 确保WB实验操作步骤正确，包括蛋白样品的制备、电泳分离、转膜和抗体探针的使用等。 检查蛋白样品的浓度是否适当

• • WB蛋白加入loading buffer配好后没有煮变性，直接放到-80冰箱冻起来了会降解吗？

  当WB蛋白加入loading buffer配好后，如果没有经过煮变性处理，直接放到-80℃冰箱冻起来，一般情况下不会导致蛋白的降解。 WB蛋白的加载缓冲液（loading buffer）通常包含一定浓度的还原剂（如β-巯基乙醇）和SDS（十二烷基硫酸钠），这些成分有助于蛋白质的变性和解离。在

• • 表达出的蛋白跑WB比预测的小，这是为什么呢？

  当蛋白质在Western blot（WB）实验中跑得比预测的小，可能有以下几个原因： 1.蛋白质修饰：蛋白质在细胞内可能会经历多种修饰，如磷酸化、甲基化、乙酰化等。这些修饰可以改变蛋白质的电荷、空间构象和分子量，从而影响其迁移速度。如果蛋白质发生了修饰，可能会导致其在SDS-PAGE凝胶中

• • 两个蛋白WB时共用了内参，但作图两个蛋白分别在两张图，这种可以用同一内参吗？

  当你在Western Blot (WB) 实验中使用内参蛋白（例如 GAPDH、β-actin 等）来对两个目的蛋白进行标准化时，理论上，只要你确保了以下几点，即使两个蛋白被分别展示在两张图中，你也可以使用相同的内参蛋白： 来自同一样品：确保两个目的蛋白与内参蛋白都是来自同一份细胞裂解液