蛋白分析FAQ汇总

• • 如何通过阅读质谱图来得出化合物/物质的名称？

  质谱图是一种图形表示，横轴代表质量/电荷比（m/z），纵轴代表相对丰度。每个峰代表一个离子，峰的位置表示该离子的m/z值，峰的高度表示该离子的相对丰度。 1. 识别分子离子峰： 分子离子峰（M+峰）通常是质谱图中m/z值最大的峰，代表未发生断裂的分子离子。这个峰可以提供化合物的分子质量信息

• • 怎样用Western blot检测目标蛋白质?

  Western blot通过将蛋白质样品经过SDS-PAGE电泳和膜转移，然后使用特异性抗体进行结合和检测，可以定量分析目标蛋白质的表达水平。Western blot实验的大致步骤包括样品制备、蛋白质定量、电泳分离、膜转移、抗体结合和检测等，以下是一些详细步骤和注意事项： 1.样品制备：

• • 测蛋白质结构x衍射准还是核磁共振准？

  X射线衍射和核磁共振是蛋白质结构研究中的常用方法，它们各有优缺点，准确性方面两者都能达到很高的标准，但适用的情况不同： 一、X射线衍射： X射线衍射是一种常用的测定蛋白质结构的方法。它通过将蛋白质晶体暴露在X射线束中，利用晶体对X射线的衍射来确定蛋白质的结构。 1.优点： 可以解析非常

• • 蛋白质sds聚丙烯酰胺凝胶电泳及分子量测定实验如何选择最佳凝胶浓度与缓冲液的pH？

  1.凝胶浓度的选择： 凝胶浓度的选择应该根据待测蛋白质的分子量范围来确定。一般来说，较低的凝胶浓度适用于较大分子量的蛋白质，而较高的凝胶浓度适用于较小分子量的蛋白质。 通常，常用的凝胶浓度范围是8-15%。对于较大分子量的蛋白质，可以选择较低的凝胶浓度，如8%。对于较小分子量的蛋白质，可以

• • 为什么SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳可以用于提纯蛋白质?

  SDS-PAGE电泳是一种常用的蛋白质分离和纯化技术。它的原理是利用SDS（十二烷基硫酸钠）和聚丙烯酰胺凝胶的特性，将蛋白质样品分离成不同大小的带状条带，从而实现蛋白质的纯化。 1.SDS的作用： SDS是一种表面活性剂，它能够与蛋白质分子中的氢键和疏水相互作用，使蛋白质分子展开成线性结构

• • 免疫共沉淀使用的蛋白必须含有标签（Flag、HA）吗？

  在免疫共沉淀（immunoprecipitation）实验中，通常需要使用特定的抗体来识别和富集目标蛋白。这些抗体可以与目标蛋白结合，并通过沉淀的方式将目标蛋白与其结合的蛋白一起富集出来。在某些情况下，为了更好地进行免疫共沉淀实验，目标蛋白可能需要含有特定的标签，如Flag标签或HA标签。

• • SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子量时，迁移距离如何测量？

  SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）是常用的分析蛋白质大小（分子量）的方法。在SDS-PAGE实验后，可以通过测量蛋白质在凝胶中的迁移距离来估算它们的分子量。 使用图像分析软件（例如ImageJ或其他分析软件）或标尺来测量蛋白质迁移的距离，即从点样孔到蛋白质带状条纹的距离。 如

• • 质谱法测相对分子质量，分子离子与碎片离子质荷比的最大值就是相对分子质量。求解详细原理分析

  利用质谱法（Mass Spectrometry, MS）测定相对分子质量时，通常观察到的是分子离子和各种碎片离子的质荷比（m/z）。分子离子是指分子失去或获得一个电子（不失去或分离出其它原子或原子团）而形成的离子。 在质谱图中，分子离子的m/z值（在正离子模式下）通常代表了分析物的相对分子

• • 分子量大于2k的如何用质谱检测？

  当分子量大于2k的蛋白质需要进行质谱检测时，可以采用以下几种方法： 1. 电喷雾离子化（ESI, Electrospray Ionization）: 原理: 样品溶液通过高电压的喷嘴喷出，形成含有带电的微小液滴，经过蒸发和离子/分子排斥，最终生成带电分子。 适用范围: 适用于大多数生物大

• • 请问高分子分子量分布的测定方法是什么？

  高分子分子量分布是指在一定条件下，高分子样品中不同分子量的分子所占的比例。测定高分子分子量分布对于了解高分子材料的结构和性质具有重要意义。以下是几种常见的测定高分子分子量分布的方法： 1.凝胶渗透色谱法（GPC/SEC）： 凝胶渗透色谱法是最常用的测定高分子分子量分布的方法。该方法基于高分