我们要做western blot 实验,主要做白色脂肪,怎样进行蛋白定量呢?
首先,你需要将白色脂肪组织进行适当的处理和裂解以提取蛋白质。一种常见的选择是RIPA缓冲液,它可以有效地破坏细胞膜并释放细胞内的蛋白。同时,不要忘记添加蛋白酶和磷酸酶抑制剂,以防蛋白被降解。
提取蛋白后,接下来就是蛋白质的定量。BCA蛋白定量试剂盒是一个不错的选择。你只需取适量的蛋白样品和标准品,按照说明书加入BCA工作液,然后在37°C孵育30分钟,之后用分光光度计在562 nm的波长下读取吸光值。通过比较样品和标准品的吸光值,就可以计算出样品的蛋白浓度。
接下来,按照得到的蛋白浓度,用Loading Buffer稀释样品,并进行沸腾以完全变性蛋白。然后进行SDS-PAGE电泳,蛋白转膜,抗体孵育和信号检测等步骤。
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